冰冻保存小新月菱形藻的包埋-玻璃化法.pdfVIP

维普资讯 植物生理学通讯 第43卷 第 1期，2007年 2月 l37 冰冻保存小新月菱形藻的包埋 ．玻璃化法 张丽佳，王起华 ，张恩栋，刘丽娜 辽宁师范大学生命科学学院，辽宁大连 116029 CryopreservationofNitzschiaclosterium minutissimaAllenetNetsonbyEn- capsulation-vitrificationM ethod ZHANGLi-Jia,WANGQi—Hua’，ZHANGEn-Dong，LIULi-Na SchoolofL Sciences,LiaoningNormalUniversity,Dalian，Liaoning116029,China 提要：采用包埋．玻璃化法对小新月菱形藻进行冰冻保存，探讨玻璃化溶液(PVs)配方、装载液浓度和装载时间、脱水时 间以及洗涤方法对冰冻保存存活率的影响。结果表明：小新月菱形藻在OC预冷后50％PVS2装栽60rain，100％PVS2 脱水60rain，1oto1．L。蔗糖梯度洗涤30min的条件下存活率最高，为74．1％。包埋．玻璃化法不需要特殊的冷冻设备，冰 冻程序操作简单，在藻类种质的超低温保存中有较大的应用潜力。 关键词：小新月菱形藻；包埋 ．玻璃化；存活率；冰冻保存 近年来，随着海洋微藻在鱼、虾、贝类育 AllenetNelson)由辽宁省水产研究所提供，并由 苗生产 中的广泛应用，有关饵料微藻的超低温保 我校藻类生理研究室纯化为单种。取25mL生长 存的研究 日益受到重视。小新月菱形藻是海产养 6d的小新月菱形藻(8．14xlO个．mL)，接种于含 殖中的一种优 良饵料微藻，对其超低温保存的探 有 100mLf／2培养基(Mclachlan1973)的250mL的 索有重要的应用价值 。王起华等(1999)曾采用两 三角烧瓶 中。培养条件为(22±1)℃，光照强度 步法冰冻保存小新月菱形藻并获得63．1％的较高 (43±3)I．tmo1．m-2．s～，光周期(光 ／暗)为 14Il，10h。 存活率，但是他们的方法需要采用特殊的降温设 取培养 10d的材料(静止期)用于冷冻保存。 备和较为复杂的冷冻程序，其实际应用受到很大 2植物玻璃化溶液(PVS)的组成和配制 的限制 。玻璃化法和包埋脱水法是近 2O年来建立 以PVS2配方(Sakai等 1990)为基础，通过改 的2种超低温保存新技术，毋需昂贵的降温设 变二 甲基亚砜 (DMSo)的浓度或用聚 乙二醇 备，冷冻程序比较简单，在多种植物种质超低温 (PEG20000)和聚乙烯吡咯烷酮(PVPK30)分别代替 保存中已显示出巨大的应用潜力。近 1O年来，新 DMSO，配成6种不同配方。PVS7配方参照文献 发展的包埋 ．玻璃化法则结合包埋脱水法和玻璃化 (Wu等 2003)，并稍作改动 。 法的多种优点于一身，现已在2O余种高等植物的 上述 7种PVS配方的组成有：PVS13【O％甘 种质保存中获得成功(梁宏和王起华2005：吴雪梅 油(GLY)(w／v,单位下同)+15％乙二醇(EG)+1O％ 和汤浩茹2005)。本文采用包埋 ．玻璃化法冰冻保 DMSO】、PVS2 (3O％ GLY+15％ EG+15％ 存小新月菱形藻，并探讨了玻璃化溶液组成、脱 DMSo)、PVS3 (3O％ GLY+15％ EG+2O％ 水时间、装载液浓度、装载时间以及洗涤方法对 DMSo)、PVS4 (3O％ GLY+15％ EG+25％ 其存活率的影响，以探求一条不需要特殊设备、