CDP抑制乳腺癌细胞T47D生长及逆转p16基因甲基化的研究.pdfVIP

维普资讯 学 学 医 学 版 JSichuanUniv (M edSc Eddi) 2…oo4”；35(6)．7…92_7～96 dSciE CDP抑带Jl孚L腺癌细胞 T47D生长及逆转 p16基因甲基化的研究 徐 丹，覃 扬△，孙芝琳，孙泽芳 四Jll大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室 (成都 610041) 【摘要】 目的 研究CDP(一种中药成分)抑制乳腺癌 T47D细胞株生长的机制。方法 不同浓度的5一氮杂胞 苷 (5-azacytidine，5-aza—CR)或 CDP与T47D细胞培养数天 ，细胞增殖试验 (MTT法)检测对 T47D细胞生长的影 响；流式细胞术检测凋亡峰和细胞周期改变；甲基化特异性PCR(MsP)检测用药前后 P16基因甲基化、非 甲基化状 态及程度的改变。结果 5-aza—CR和CDP均对细胞生长呈浓度和时间依赖性抑制作用 (Po．05)；在试验药物浓 度 5-aza—CR2~mol／L，CDP50~mol／L的作用下，对细胞生长周期有影响：G。／G 期细胞数 由65．1 增加 到 71．3 和 84．3 ．S期细胞数 由 19．4 减少到 14．3 和 7．2 ；药物作用细胞 6d后对 P16基因有完全去 甲基化 作用 。结论 CDP可 以逆转 P16基因高甲基化 ，并可能因此抑制肿瘤细胞生长 。 【关键词】 CDP 5-氮杂胞苷 乳腺癌 pl6基 因 甲基化特异性 PCR 【中图分类号】 R730．53 Researchon theGrowth InhibitionofT47D CellandReversionofp16HympermethylationbyCDP XU Dan，OIN Yang ．SUNZhi一／in，SUNZe—fang． DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology，WestChinaSchoolof PreclinicalandForensicMedicine，SichuanUniversity．Chengdu610041。China [Abstract] Objective Toinquireintothemechanism ofCDP(apurifiedcomponentofChinesecrudedrug) ininhibitingthebreastcancerT47D cellgrowth．M ethods T47D cellsweretreatedwithdifferentconcentrationof 5-azacytidine(5-aza—CR)andCDPforseveraldays．Thegrowthratewasassessedbycellproliferationexperiment (MTT colorimetricassay)．Thechangesinapopticpeakandcellcycledistributionweredetectedbyflow cytometry (FCM )．Thelevelsofmethylationandunmethylation statusofpl6weredetectedbymethylation specificPCR (MSP)．Results Aftertreatmentwiththetwodrugs，thecellgrowthratedecreasedinadoseandtimedependent manner(PO．05)．Thecellcyclewasinfluencedbythewell—chosenconcentrationof5-aza—CR (2／~mol／L)and CDP (50~／mol／L)：thecellnumberincreasedfrom 65．1％ to71．3 ，84．3 inG0／Glphaseanddecreasedfrom 19．4 to 1