HBV DNA重组质粒转染小鼠卵母细胞的研究.pdfVIP

维普资讯 · 324 · 第 16卷 第 6期 癌变 ·畸变 ·突变 V01．16 No．6 2004年 11月 Carcinogenesis，TeratogenesisandMutagenesis Nov，2004 · 论著 · HBV DNA重组质粒转染小鼠卵母细胞的研究 张清健 ，黄天华 卜，谢庆东 ，曾丽萍 (1．汕头大学医学院生殖医学研究中心；2汕头大学医学院第一附属医院妇产科，广东 汕头 515041) 摘【要】背景与目的：乙型肝炎是危害人类健康的全球性疾病。为了探索乙肝病毒通过卵母细胞垂直传递的可能性，对 HBVDNA 重组质粒能否转染小鼠卵母细胞进行了研究。 材料与方法：将小鼠卵母细胞与pBR322-HBVDNA重组质粒进行共培养后，分别 提取卵母细胞DNA及制备小鼠卵母细胞中期染色体。用PCR、Southern、斑点杂交及FISH技术证实HBVDNA能否转染小鼠卵母 细胞。结果：PCR试验在受检样本中观察到HBVDNA阳性条带。Southern试验在受检 PCR产物中观察到明显的阳性杂交信号。 用每次实验的最后3次洗液进行斑点杂交未发现 HBVDNA阳性信号，排除了PCR和 Sou~ern阳性结果来 自洗液污染的可能 性。荧光原位杂交在 1ooo个卵母细胞中的36个中期相内发现HBVDNA杂交信号。结论：HBVDNA序列能够通过卵母细胞 的透明带和细胞膜，进入卵母细胞内并整合到卵母细胞染色体上。此类卵母细胞与正常精子受精时，有可能作为载体将HBV DNA带进胚胎 。 关【键词】HBVDNA；转染；小鼠；卵母细胞；整合；染色体 中图分类号：R512．62 文献标识码：A 文章编号：1004—616X(2oo4}06—0324—04 study on Transfection ofMouseOocyteswith RecombinantPlasmid．pBR32 HBV ZHANGQin ian，删 ANGTian—hua，XⅢ Qing-dong，etal (ResearchCenterforReproductiveMedicine，ShantouUniversityMedlcafCollege，Shantou515O41，China) M【IS3RACT】BACKGROUND AIM：HepatitisB isa publichealth problem ofworldwide importance．To explore feasibilityofHepatitisBvirus(HBV)verticallytransmittingviaoocytes，thetransfectionofmouseoocyteswith recombinantplasmid，pBR322-HBV was studied．MATERIAL AND METHODS：Genomic DNA Was isolated nad hte metaphaseswere prepared，respectively from mouse oocytesCO—cultured wiht pBR322-HBV DNA plasmids ． PCR． Souhtem blot，Dothybridization nadFISH wereperformedtodemonstrate ifhtemouseoocyteswere transfectedby pBR322-HBV plasmid．RESULTS：PCR detected positive bnads in hte tested samples， nad hten Souhtem blot revealde clear hybridiazt