水牛体细胞核移植相关影响因素的研究.pdfVIP

藐}72 ． J 蘸 gAg．Bi。 i。 20D0e8c年．．122Or0月8 文章编号 ：1008—3464 (2008)04—0309—06 水牛体细胞核移植相关影响因素的研究 陆凤花，石德顺，韦英明，潘红平，黄凤玲，谭世俭，王晓丽，黄雅琼 (广西大学 动物繁殖研究所 ，广西 南宁 530005) 摘要：主要是探讨水牛卵母细胞的体外成熟与供体的年龄和性别对其核移植效果的影响。体外成熟培 养 22～24h的水牛卵母细胞 ，在含有 5b~g／mL细胞松弛素的操作液 中进行去核，然后将经 0．1~／g／mL蚜 栖菌素 (Aphidicolin，APD)培养处理 24h，再用 0．5 胎牛血清 (FBS)培养2d的水牛耳皮成纤维细胞 注射到去核的卵母细胞卵周隙中，再经 电融合形成重构胚 。重构胚经 5gmol／L离子霉素激活处理 5min并 在 2mmol／L的二 甲氨基嘌呤 (6-DMAP)中培养 3h后 ，在含有颗粒细胞单层细胞 的微滴 中 (30 L)培 养 7d，观察其卵裂和胚胎发育情况。结果显示 ：在添加有 10ng／mL上皮生长 因子 (EGF)成熟液 中培养 的受体水牛卵母细胞的融合率和重组胚卵裂率与对照组无显著差异 (PO．05)，但其囊胚发育率明显高于 对照组 (18．53 VS．7．56 ，PO．05)。来 自胎儿 (3个月)或成年 (一头 5～6岁，另一头 22岁)水牛 的耳皮成纤维细胞核移植后重组胚的卵裂率差异不显著 (P0．05)，但水牛胎儿体细胞构建的重组胚囊胚 率显著高于成年体细胞 (22．55 VS．10．77 和8．O9 ，PO．05)。雌性水牛成纤维细胞构建的重组胚的 囊胚发育率 (20．23％)显著 高于雄性水 牛体细胞 的囊胚率 (10．16 ，P 0．05)。以上结果表 明： (1)成熟液 中添加 EGF能提高受体卵母细胞核移植后的胚胎发育率 ；(2)水牛体细胞核移植效果受供体的 个体年龄和性别的影响：胎儿成纤维细胞 的核移植效果优于成年 的成纤维细胞 ，而且 以雌性的效果较好 。 关键词 ：水牛；核移植 ；成纤维细胞 ；卵母细胞 ；胚胎 中图分类号 ：$814．8；$823 文献标识码 ：A Studiesonsomaticcellnucleartransferinbuffa1o LU Feng—hua，SHIDe—shun，W EIYing—uring，PAN Hong—ping，HUANG Feng-ling， TANShi-jian，WANGXiao—li，HUANG Ya-qiong (AnimalReproductionInstitute，GuangxiUniversity，Nanning530005，China) Abstract：Developmentofnucleartransfer (N I、)embryosreconstructedwithdifferentsourceof buffalorehipientoocytesand donorcellswere investigated in the presentstudy．Buffalo oocytes obtained from ovariesatslaughterwere matured invitro for22，～24 h and then enucleated in manipulationmedium containing5~／g／mLcytochalasinB．BuffalofibroblastsculturedinDulbecco’S ModifiedEagleMedium (DMEM)supplementedwith0．1l／g／mLAphidicolin (APD)+0．5 fetal bovineserum (FBS)for24handfollowingin0．5％FBSfor2daysweretransferredintoenucleated oocytesby electronic fusion．The reconstructed embryos were acti