纤维糊精酶DM1与CBD的融合及融合酶性质分析.pdfVIP

72ggNNo． J Ag． Bi。。i盖 20Doe8c年．，12200月8 文章编号 ：1008—3464 (2008)04—0365—07 纤维糊精酶 DM1与 CBD的融合及融合酶性质分析 庄永红 ，刘利1,3，段承杰 ，唐纪 良 ，冯家勋 (1 广西大学 生命科学与技术学院，广西 南宁530005；2 广西亚热带生物资源保护利用重点实验室， 广西 南宁530005；3 贺州学院，广西 贺州 542800) 摘要 ：纤维糊精酶 (cellodextrinase)属纤维素酶类 中的一类 ，可 以从短链纤维素分子上水解糖苷键生 成葡萄糖或纤维二糖 。曾克隆了纤维糊精 酶 DM1的编码基 因，该酶与生黄瘤 胃球菌 (Rurninococcus flavefaciens)的CellodextrinaseA 的一致性为 52％。通过人工合成基因的方法合成 了细菌来源的3个分 别为家族 一4—9 (GenBank索引号为 AAA73869)、家族ⅢC(GenBank索引号为 BABB33148)和家族 1O (GenBank索引号为 CAA60493)的纤维素结合功能域 (CBD)和连接桥 (1inker)的DNA序列。通过把编 码纤维糊精酶DM1(GenBank索引号为ACA61162)的催化功能域 (CD)的DNA序列与合成的CBD和连 接桥 的DNA序列进行融合 ，构建 了3个融合酶 ，并分别在大肠杆菌 BL21中得到过量表达。纤维素结合实 验表 明，3个纯化 的融合酶对结晶纤维索 (Aviee1)和滤纸粉末均有结合能力，融合酶 CBD一4—9-DM1、 DM1一CBD10和 DM1一CBDIllC与结 晶纤维素 (Avice1)结合 的蛋 白质 占总蛋 白的比例分别为 58．6O 、 51．16 和 21．13 ，与滤纸粉末结合的蛋 白质 占总蛋 白的比例分别为 65．59 、6O．47 和 22．54 ，证实 与原始酶相 比3个融合酶的CBD均有纤维素结合 的功能。酶学特性研究表 明，融合酶的最适 pH、最适温 度 、pH稳定性和温度稳定性等没有显著改变 ，均未检测到 3个融合酶有新 的活性，但它们对 p-nitrophenyl B—D-eellobioside(pNPC)、p-nitrophenyl一13-D-glucopyranoside(pNPG)和 liehenan等底物 的比活力显著降 低。3个融合酶 CBD一4—9-DM1、DM1一CBD10和 DM1一CBD111c对 pNPC的比活力分别为原始酶 DM1的 26 、2 和 2 ，对 lichenan的比活力分别为原始酶 DM1的 12 、8 和 2 ，几乎检测不到后两个融合 酶对 pNPG的酶活。 关键词 ：纤维糊精酶 ；纤维素结合功能域 ；基 因融合 ；DNA合成 中图分类号 ：Q78 文献标识码 ：A Fusedcel10dextrinaseI)M 1withCBDsandcharacterizati0nOffusedenzymes ZHUANG Yong—hong’。，LIU Li’。，DUANCheng—jie。，TANGJi—liang ’。，FENGJia—xun ，。 (1 CollegeofLifeScienceandTechnology，GuangxiUniversity，Nanning530005，China； 2 GuangxiKeyLaboratoryofSubtropicalBioresourcesConservationandUtilization，Nanning530005，China； 3 HezhouUniversity，Hezhou542800，China) Abstract：Cellodextrinasesbelongtoaclassofcellulasesandcan hydrolyzeshort-chain cellulose toproducecellobioseorglucose．A cellodextrinase (DM 1)一encodinggenewaspreviouslyclonedfrom uncult