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中国科技论文在线
JSRV 囊膜基因全长的抗原表位预测、原核
表达与 western-blot 鉴定#
1 1 1,2**
徐斯日古楞 ，刘月 ，刘淑英
5 （1. 内蒙古农业大学兽医学院，呼和浩特 010018；
2. 农业部动物临床诊疗技术重点实验室，呼和浩特 010018）
摘要：目的：为了制备绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白的单克隆抗体和进一步体外研究囊膜蛋白在
绵羊肺腺瘤病致瘤中的可能作用。方法：采用生物信息学技术分析预测囊膜蛋白优势抗原表
位，构建 pET32a/JSRV-env 囊膜蛋白原核表达质粒，该质粒转入工程菌DE3 ，经IPTG 诱
10 导表达His-ENV 融合蛋白，并用western-blot 技术进行鉴定。结果：以本实验室已构建好的
绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白真核表达质粒pcDNA3.1-JSRV-env 为模板进行PCR 反应，扩增出
1887bp 基因片段，其中包含 1848bp 全长的env 基因，bcepredB ，IEDB-B ，DNAStar 软件
工具分析优势抗原表位，并亚克隆到pET32a 原核表达载体，经PCR 、单、双、酶切和测序
证明pET32a-JSRV-env 质粒构建成功。经IPTG 诱导表达88KD 融合蛋白，且诱导8h 时表
15 达量最大。同时western-blot 技术鉴定His-ENV 融合蛋白。结论：分析得到绵羊肺腺瘤病毒
囊膜蛋白 10 个区段为潜在的优势抗原表位。构建 JSRV-env 全长基因的原核表达质粒
（pET32a/JSRV-env ），并诱导表达囊膜蛋白，通过Western-blot 技术鉴定了所表达的蛋白。
关键词：绵羊肺腺瘤病毒；囊膜蛋白；抗原表位；原核表达；western-blot 鉴定
中图分类号：S 859.81
20
Prediction of B cell epitope, prokaryotic expression of
JSRV-env and Identification by western-blot
1 1 1,2
XU Siriguleng , LIU Yue , LIU Shuying
(1. College of Veterinary Medicine, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018;
25 2. key laboratories of agriculture for animal clinical diagnosis technology, Hohhot 010018)
Abstract: Objective: To prepare monoclona
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