紫花苜蓿(medicago sativa)抗旱相关促分裂原活化蛋白激酶mapk基因的克隆.pdfVIP

18 内蒙古石油化工 20 11年第5期 紫 花 苜 蓿 ( medi cago s at i va) 抗 旱 相 关 促 分 裂 原 活 化 蛋 白 激 酶 MAPK基 因 的 克 隆 白雪梅 ( 内蒙古化工职业学院) 摘 要：用异硫氰酸胍方法提取紫花苜蓿超级阿菠萝(Apol l o Supr eme) 植株嫩叶和幼根的总 RNA；采用RT—PCR的方法获得紫花苗蓿超级阿菠萝抗旱相关促分裂原活化蛋白激酶MAPK基 因中 MMK 基因的cDNA序列全长。c DNA序列测定表明：我们克隆到 的MMK 基因的cDNA序列全长 l l l 6bp ，由此推导的氨基酸序列与GeneBank上MMK ( X82270) 基 因的cDNA序列所编码 的氨基酸序 列完全相 同，但其中有1 个氨基酸 的密码子有所不 同。 关键词：紫花苜蓿；MAPK级联；cDNA；抗旱相关 中图分类号：$5 2 ．035 ．3 文献标识码：A 文章编号：1006- - 79 81( 2011) 0 5—0018—0 3 低温 、干旱、高盐等环境胁迫严重影响植物生长 Supr eme) 品种；转化受体菌DH5a 为实验室保存 ； 和作物产量。关于植物抗逆( 耐) 性的细胞和分子反 pMDl 9- - T Vect er 、限制性内切酶BamH I 、Xba I 应机理研究 已有广泛报道f l , Z] ，植物细胞能接受和传 为华美生物工程公司产品，Ther mos cr i pt TMRT反 递环境信号，并产生适宜 的生理反应，而蛋 白激酶通 录酶、TaqDNA聚合酶为Invi t r ogen公司产品； 过磷酸化与去磷酸化在信号传递过程中起着重要作 DNA快速 回收纯化试剂盒为上海生工生物工程有 用[ 副。胁迫信号 的传递是一个立体网络，促分裂活化 限公司产品。 蛋白激酶(MAPK，mi t ogen- - act i vat ed pr ot e i n ki - 1．2方法 na se ) 级联反应途径位于网络中心，通过磷酸化与去 1．2 ．1紫花苜蓿( Me di c ago Sat i va) 幼苗 的处理 磷酸化将多种胁迫信号逐级放大、传递 ，从而调控基 紫花苜蓿幼苗培育至8片真叶时，将其从基质 因表达 。 ( 1 ／e MS固体培养基) 中取出洗净，用20 ％ 近年来，人们从拟南芥 、苜蓿、烟草等高等植物 PEG6000处理60mi n后取幼叶和幼根，用液氮冷 中分离出许多MAPK。紫花苜蓿的MAPK基因到目 冻，保存于一80℃超低温冰箱备用。 前已被克隆出四个基因：MMKl 、MMK2 、MMK3、 1．2 ．2促分裂原活化蛋白激酶基 因MMK 的cD． MMK ，其中MMK 可被重金属、低温、干旱、触摸、 NA克隆 创伤、真菌诱导信号等多种环境信号所透导表 用异硫氰酸胍法[ 1们提取叶片和幼根总RNA。 达[ 7- - 13] 。 根据Gene Bank上发表的MMK 基因 本研究从紫花苜蓿超级阿菠萝叶片和幼根中克 ( X82270) mRNA序列设计一对特异性引物， 隆了MMK 基因的cDNA全序列，并进行了序列分 MsMMK P1 l 5’一TTgCTCTAg ATCAATg— 析，确定所克隆的MMK 基 因是紫花苜蓿基因组 中 gCCAgAg TTAACC一3 ’ ·Ms MMK P2 t 5 ’一 存在 的抗旱相关MAPK基 因家族的一员。在水分胁