ICU病房鲍曼不动杆菌的耐药表型及β内酰胺酶基因型检测.pdfVIP

山东医药 2011年第 51卷第 3O期 ICU病房鲍曼不动杆菌的耐药表型 及 I3内酰胺酶基因型检测 曹银洁 (胜利油田中心医院，山东东营257034) 摘要：目的 检测、分析 ICU病房鲍曼不动杆菌耐药表型及 B．内酰胺酶的基因型。方法 收集 ICU病房中感 染患者的痰、创面分泌物、血、尿、胆管引流液、大便、脑脊液、胸水、腹水等标本 ，从 中培养、分离出鲍曼不动杆菌309 株。用 K．B纸片扩散法测定其对 13种抗菌药物的耐药性；用 Nitrocefin纸片法和改良三维试验大平皿法对 B一内酰 胺酶进行检测 ；单一引物PCR扩增法检测 OXA型 B．内酰胺酶基 因OXA-23、OXA-24，多重引物 PCR扩增法检测 ESBLs和AmpC酶基因。结果 除亚胺培南(IMP)外 ，309株鲍曼不动杆菌对余 12种抗菌药物的耐药率均超过 50％，其中294株 (95％)产 B一内酰胺酶 ，171株 (55．24％)能经改良三维试验大平皿法进行酶分型。PCR扩增对 IMP中介或耐药的53株鲍曼不动杆菌中有 11株扩增到 blaOXA-23，产 ESBLs组 29株中有5株扩增 出blaSHV、 blaCTX—M-14、blaCTX．M-3，2株出现blaSHV、blaCTX．M-1。多重 PCR检测中，仅有3株检测到AmpC酶基因。结论 ICU病房鲍曼不动杆菌多重耐药常见，B．内酰胺酶产生率高。耐药菌的碳青霉烯酶以blaOXA-23型为主，ESBLs、 AmpC酶基因的多重PCR阳性率均低。 关键词：鲍曼不动杆菌；多药耐药 ；B-内酰胺酶 中图分类号：R379 文献标志码 ：B 文章编号：1002-266X(2011)30-0111-02 近年来随着广谱抗生素的使用，鲍曼不动杆菌 以超声破碎法制备B一内酰胺酶粗提物，头孢硝噻吩 对临床常用抗生素的耐药性逐年增加uj。2005年 1 显色法检测提取物。按照文献 的方法操作 ，加入 月～2010年6月，本研究对 309株鲍曼不动杆菌耐 待测样本，放置平皿于35cI=温箱过夜培养 18～24 药表型和常见 B一内酰胺酶基因类型进行检测。现 h，平皿上抑菌圈出现变形为阳性，反之为阴性。 报告如下。 1．4 鲍曼不动杆菌菌株 B一内酰胺酶基因类型的检 1 材料与方法 测 分别采用QiagenPlasmidMinikit及手工碱裂解 1．1 材料 309例鲍曼不动杆菌菌株分离 自胜利 法提取质粒。①单一引物 PCR扩增法检测 OXA型 油田中心医院ICU病房确诊鲍曼不动杆菌感染的 p一内酰胺酶基 因 OXA-23、OXA-24，方法参考文 患者痰、创面分泌物、血、尿、胆管引流液、大便、脑脊 献 】。② 多重 引物 PCR扩增法检测 ESBLs和 液、胸水、腹水。使用 VITEK60细菌 自动鉴定仪及 AmpC酶基因，ESBLs的3对引物及AmpC的6对引 NFC鉴定卡鉴定菌种，标准菌株为大肠埃希菌 物设计及 PCR反应步骤参考文献_4J。将所得扩增 ATCC25922和铜绿假单胞菌 A代C27853。抗菌纸 产物经琼脂糖凝胶电泳观察，并用凝胶成像系统扫 片亚胺培南 (IPM)、哌拉西林 (PIP)、哌拉西林／他唑 描成像进行分析。 巴坦(TZP)、氨苄西 舒 巴坦 (ASM)、头孢他啶 2 结果 (CAZ)、头孢吡肟 (FEP)、头孢哌酮／舒巴坦 (SCF)、 2．1 鲍曼不动杆菌对 l3种抗菌药物的耐药率 阿米卡星(AK)、复方新诺明(SXT)、左旋氧氟沙星 2005年鲍曼不动杆菌对 IPM、AK、SXT、ASM、FEP、 (LEV)、氨 曲南 (ATM)、头孢噻肟 (CTX)、头孢曲松 CAZ、TZP、PIP、ATM、CTX、CRO 的耐药率分别为 (CRO)。M—H培养基 。 5．O％ 、15．2％ 、20．3％ 、21．4％ 、18．8％ 、20．5％ 、 1．2 鲍曼不动杆菌菌株耐药表型检测