酿酒酵母表面展示表达系统及应用.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（１２）：１１６～１２２ 酿酒酵母表面展示表达系统及应用 １ ２ １ １ 郭　钦 　张　伟 　阮　晖 　何国庆 （１浙江大学生物系统工程与食品科学学院　杭州　３１００２９　２温州医学院　温州　３２５０３５） 摘要　酵母细胞表面展示表达系统是一种固定化表达异源蛋白质的真核展示系统，即把异源靶 蛋白基因序列与特定的载体基因序列融合后导入酵母细胞，利用酿酒酵母细胞内蛋白转运到膜 表面的机制（ＧＰＩ锚定）使靶蛋白定位于酵母细胞表面并进行表达。它利用细胞表面展示技术使 外源蛋白固定化于细胞表面，从而生产微生物细胞表面蛋白，可应用于生物催化剂、细胞吸附剂、 活疫苗、环境治理、蛋白质文库筛选、高亲和抗体、生物传感器、抗原／抗体库构建、免疫检测及亲 和纯化、癌症诊断等领域。主要介绍了该技术的基本原理、研究现状、应用及发展前景。 关键词　酿酒酵母　细胞表面展示表达　凝集素　絮凝素 中图分类号　Ｑ８１９ 　　酿酒酵母细胞壁厚约２００ｎｍ，主要由外层的甘露糖 　　酵母细胞表面展示表达系统是一种固定化表达异 蛋白和内层的葡聚糖骨架组成，两者通过共价健相连。 源蛋白质的真核展示系统，即把异源靶蛋白基因序列 外层甘露糖蛋白有两种类型，一种是通过非共价健与 （外源蛋白）与特定的载体基因序列（又叫定位序列）融 酵母细胞壁松散相连并能被ＳＤＳ提取出来的低分子量 合后导入宿主细胞，利用酿酒酵母细胞内蛋白转运到 蛋白；另一种是必须被葡聚糖酶酶解细胞壁的 １，３ 膜表面的机制（ＧＰＩ锚定）使靶蛋白表达并定位于酵母 β? ? ［４］ 和 １，６葡聚糖层后才能被 ＳＤＳ抽提的高分子量蛋 细胞表面 。外源蛋白与载体蛋白序列的融合方法有 β? ? 白，包括凝集素、絮凝素、Ｓｅｄ１ｐ、Ｃｗｐ１ｐ、Ｃｗｐ２ｐ和 Ｃ末端融合、Ｎ末端融合、插入融合。Ｎ末端融合适用 Ｔｉｐ１ｐ、Ｔｉｒ１ｐ、Ｓｒｐ１ｐ等。后者的结构中大多都含有 ＧＰＩ 于载体蛋白的定位区域在它的Ｃ末端；Ｃ末端融合适 ［１］ 用于载体蛋白的定位区域在它的Ｎ末端；插入融合适 锚定区域 。ＧＰＩ锚定区域与细胞蛋白的Ｃ端共价相 ? 连，为蛋白与细胞膜提供稳定的连接。ＧＰＩ锚定蛋白的 用于融合位点在载体蛋白的中部区域。与噬菌体和大 Ｃ端包含疏水多肽，当细胞蛋白被合成，前体蛋白通过 肠杆菌细胞表面展示技术相比，酿酒酵母细胞表面展 ? 羧基末端的疏水序列锚定在内质网膜上，其余蛋白则 示表达系统具有糖基化作用、蛋白翻译后折叠和与哺 位于内质网的内腔中。在极短的时间内，疏水序列在 乳动物类似的分泌机制的优势，且一个酵母细胞大概 ４ 转酰氨基酶作用下 位点裂开并同时被 ＧＰＩ锚置换， 能够展示表达１０个凝集素蛋白，更利于高效表达具有 ω 然后蛋白被运输到高尔基体再通过分泌途径分泌至细 生物活性的复杂蛋白。 胞膜外。在蛋白水解酶作用下，分泌信号序列被切除， １　酵母细胞表面展示表达系统构成 细胞蛋白被ＰＩＰＬＣ从细胞膜上释放以ＧＰＩ锚定形式与 ? 葡聚糖共价相连并被转运至细胞壁外［２］。可在许多真 １．１　载　体 ［３］ 　　一个成功的表达载体应满足４个条件：（１）具有信 核生物的质膜蛋白中发现ＧＰＩ ，其结构高度