草鱼呼肠孤病毒HZ08株VP4蛋白单克隆抗体的制备及鉴定.pdfVIP

第 卷第 期 水 产 学 报 年 月 文章编号 草鱼呼肠孤病毒 株 蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 曾伟伟 王 庆 王英英 石存斌 吴淑勤 中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部渔用药物创制重点实验室 广东省免疫技术重点实验室广东 广州 摘要 为了建立针对草鱼呼肠孤病毒 流行株的血清学检测方法实验构建了能高效表 达 株主要衣壳蛋白 的重组表达载体 利用纯化的 重组蛋白免 疫小鼠取免疫小鼠的脾细胞与 细胞融合经过克隆和筛选获得 株能稳定分 泌抗 重组蛋白单克隆抗体 的杂交瘤细胞分别命名为 和 抗体经亚型鉴定均为 轻链为 链间接 试验证明 株杂交瘤细胞分泌的 可特异性识别 与 均无交叉反应 选择 作为腹水生 产细胞株免疫小鼠后腹水 效价为 和 结果显示这株杂交 瘤细胞分泌的 能够特异性识别 病毒粒子 本实验制备的 具有良好的生 物学特性为 流行株血清学检测方法的建立及 蛋白相关功能研究奠定了基础 关键词 草鱼呼肠孤病毒 蛋白 单克隆抗体 中图分类号 文献标志码 隶属于水生呼肠孤病毒属为呼肠孤 株为从浙江湖州分离到的一个新 病毒科一新成员是中国大陆分离的第一株鱼类 毒株于 年已完成全基因组测序 并进 病毒 该病毒主要引起中国越南缅甸等亚 行了较为系统的研究 初步的流行病学调 洲国家淡水养殖 中的草鱼 查分析表明 目前导致草鱼出血病流行的草鱼 品种在鱼种阶段发生出血病死亡率一 呼肠孤病毒在核苷酸序列和推导的氨基酸序 般为 最高可达 而且还 列同源性上多数和 株比较相似 当 能感染青鱼麦穗鱼等使其发生出血病症状而 前草鱼出血病的防治工作任务非常艰巨主要 死亡 该病毒流行广危害大死亡率高发病 是对疫情要早发现早确诊早控制早防疫而 季节长严重影响了广大养殖者的积极性和我 关键问题之一是早确诊也就是草鱼出血病病 国淡水养殖业的健康发展 草鱼呼肠孤病 毒的快速检测技术问题只有建立快速敏感 毒具双层衣壳病毒粒子平均直径为 特异的草鱼出血病诊断技术并应用到实际防治 二十面体对称无囊膜基因组由 条分节 工作中去才能真正解决 一线 急需 段的双链 组成 目前己经报道了近 个 株 基因编码的 蛋白可 分离株包括 能为病毒的主要外衣壳蛋白对 编码蛋白的二 级结构亲水性柔性区抗原性进行预测显示其