pH和色谱柱对日本鳗鲡肝脏抗菌肽分离纯化效果的影响及抗菌活性检测.pdfVIP

第 卷第 期 水 产 学 报 年 月 文章编号 和色谱柱对日本鳗鲡肝脏抗菌肽分离纯化 效果的影响及抗菌活性检测 张东玲 关瑞章 黄文树 熊 静 徐继松 宋宝东 集美大学水产学院福建 厦门 中国科学院水生生物研究所湖北 武汉 中国科学院研究生院北京 集美大学鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心福建 厦门 鑫双宝生物科技厦门有限公司福建 厦门 摘要 为了能够快捷地分离纯化出单一的抗菌肽实验采用不同 值 离子交换流动相 反相液相层析流动相 缓冲液不同色谱柱 离子交换和凝 胶过滤层析柱分别与反相液相层析柱 联用对日本鳗鲡肝脏抗菌肽分离纯化效果进行了比 较并分析了琼脂板扩散法和微孔液体培养法检测抗菌活性的优缺点 结果显示 缓冲液为最佳离子交换流动相蛋白提取率为 得到 个洗脱峰反相液相层析 种 缓冲液分离效果均不理想凝胶过滤层析柱与反相液相层析柱联用能明显改善 日本 鳗鲡肝脏抗菌肽分离纯化效果洗脱峰数量较多峰形单一且尖锐狭窄基线平而低 琼脂 板扩散法检测抗菌活性操作简单实验结果直观但所需蛋白量较多可用于蛋白粗提物抗 菌活性的检测微孔液体培养法检测抗菌活性灵敏所需蛋白较少可用于后期色谱分离纯 化蛋白抗菌活性的检测 关键词 日本鳗鲡 抗菌肽 色谱柱 抗菌活性 中图分类号 文献标志码 抗菌肽作为非特异性免疫的一个重要因子 床试验或应用 广泛分布于动植物细菌和病毒内 它们具有广 抗菌肽的获得主要有天然材料的提取和分子 谱的抗菌抗病毒活性对包括抗革兰氏阳性菌阴 克隆两种方法 分子克隆技术比较成熟获得抗 性菌真菌病毒寄生虫甚至肿瘤也有很好的杀 菌肽相对比较简单快捷但所得抗菌肽均是已知 灭效果同时也有免疫调节或直接作为免疫佐 的天然材料提取有利于发现新的抗菌生物活性 剂灭活疫苗等 近年来抗生素的大量使用 物质不失为一种好的创新方法但其分离程序繁 导致耐药菌群的出现且耐药性越来越强人们希 琐 天然材料提取抗菌肽仍是学术界一个研究热 望能找到一种抗生素的替代品抗菌肽攻击细菌 点 本实验探讨了采用不同分离纯化条件对日本 细胞膜的作用方式使人们相信细菌不易对其产生 鳗鲡肝脏抗菌肽分离纯化效果的影响以及相应 抗性它对耐药菌株良好的抑杀效果被证实后被 的抗菌活性检测技术以期为今后抗菌肽的分离 认为是传统抗生素最佳替代品围绕它的理论研 纯化提供重要的技术参考同时也丰富了抗菌肽 究与实践应用不断开展已有多种抗菌肽进入临 研究的基础资料 收稿日期 修回日期 资助项目公益性行业农业科研专项 福建省教育厅科技项 目 厦门市工程技术研究中心创新项 目