栉孔扇贝急性病毒性坏死病毒巢式PCR检测方法的建立.pdfVIP

第 卷第 期 水 产 学 报 年 月 文章编号 栉孔扇贝急性病毒性坏死病毒巢式检测方法的建立 李 晨 王崇明 曲 朋 黄 絰 中国水产科学研究院黄海水产研究所山东 青岛 中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室山东 青岛 摘要 为更好地实现对养殖海区栉孔扇贝急性病毒性坏死病毒 的快速诊断和分子流行病学的调查以及 的疫情监测选择 全基因组序 列中的保守区段应用 软件设计一对巢式引物用于 的检测 结果 显示引物的扩增片段分别为 和 实验优化了体系中 和浓度及 扩增程序中的退火温度并建立了完善的 巢式检测技术 研究表明该检测 技术具有较高的敏感性可稳定检测出 扇贝样品组织总核酸中 的病毒粒子 关键词 栉孔扇贝 急性病毒性坏死病毒 巢式 中图分类号 文献标志码 栉孔扇贝 俗名干贝蛤其 华贵栉孔扇贝杂色蛤 闭壳肌制成 海扇属软体动物门 瓣 紫贻贝 翡 腮纲 珍珠贝目 扇贝 翠贻 贝 长牡蛎 科 扇贝属 生活于低潮线以下 自然 香港巨牡蛎和方斑东风 分布于我国辽宁的大连及山东半岛一带沿海 螺 等 世纪 年代末 年代初人工育苗关键技术的突 目前用于检测 的传统检测技术有组 破和半人工采苗技术的日臻成熟使栉孔扇贝养殖 织病理切片电镜病理切片免疫学方法还有分子 迅速成为我国北方沿海贝类养殖主导产业之一 检测技术如环介导等温扩增法 但是随着产业规模的迅速扩大以及养殖期的延 和实时荧光定量 长加之沿海经济的快速发展和城市化进程加快 等 传统的检测技术存在着操作繁琐耗时 造成近岸海水养殖水域环境日益恶化病害问题时 长灵敏度和特异性不够理想不能定量等缺点分 有发生 年以来我国北方沿海养殖栉孔扇 子检测技术虽然灵敏度较高但极易污染给检测 贝夏季连年暴发大规模死亡 累积死亡率高达 带来困扰 巢式 检测技术 是针 以上 给扇贝养殖业造成了巨大的经济损 对某一特定基因设计外侧内侧两对引物进行两 失 导致该现象发生的病征名为栉孔扇贝急 步扩增反应实现一种基因的扩增及鉴定 性病毒性 坏死症 巢式降低了扩增多个靶位点的可能性增加 其病原病毒粒子具有囊膜完整的病 了检测的特异性和可靠性多应用于微生物病原方 毒粒子直径为 核衣壳直径为