鲤疱疹病毒Ⅱ型_i_Taq__i_Man+real-time+PCR+检测方法的建立及应用.pdfVIP

第 卷第 期 水 产 学 报 年 月 文章编号 鲤疱疹病毒 型 检测方法的建立及应用 周 勇 曾令兵 张 辉 范玉顶 徐 进 中国水产科学研究院长江水产研究所湖北 武汉 摘要 针对鲤疱疹病毒 型 解旋酶基因编码区序列设 计特异性引物利用技术扩增出长度为 的基因编码区片段克隆到载 体上构建重组质粒 经鉴定与测序分析确认正确后以 倍梯度稀释重组质粒作为 标准模板进行 扩增制作标准曲线建立了鲤疱疹病毒 型的荧光定量 检测方法 检测结果显示标准曲线的相关系数 达到 斜率为 对初 始模板定量检测的范围为 特异性试验结果表明该方法可特异性 地检测出鲤疱疹病毒 型而对大鲵虹彩病毒 锦鲤疱疹病毒 以及空白对照无 检测信号 取江苏射阳和宝应两地疑似患病鲫组织核酸作为模板进行荧光定量结果表 明反应体系中的病毒量分别为 和 本研究建立的 鲤疱疹病毒 型 实时荧光定量 方法灵敏度高特异性强对因鲤疱疹病毒 感 染引起的养殖鲫造血器官坏死症的诊断与病毒病原定量检测有重要意义 关键词 鲫 造血器官坏死症 鲤疱疹病毒 型 检测方法 中图分类号 文献标志码 鲫是我国淡水养殖鱼类重要品种之一其年 核衣壳呈六边形直径为 总产量现已超过 万 在淡水养殖中占据十分 完整的病毒颗粒有囊膜呈椭圆形直径为 重要的地位 江苏省是我国鲫的主要养殖地 与另外两种分离 自鲤科 区鲫精养面积达 以上 年产量达 鱼类的病毒鲤痘疮病毒 万 产值约 多亿元位居全国首位且 和锦鲤疱疹病毒 商品鱼远销全国各地并出口到韩国 日本等国 家 然而自 年以来在江苏省鲫主养区域 关系接近 与斑点叉尾 病毒 连年发生导致养殖鲫暴发性死亡的出血性疾病 关系相对较 造成重大经济损失