几种禾草内生固氮菌的分离及固氮活性测定.pdfVIP

第17卷第5期 草业学报 37—42 V01．17，No．5 ACTAPRATACULTURAESINICA 10／2008 几种禾草内生固氮菌的分离及固氮活性测定 李倍金1，罗明¨，周俊2，孔德江3，张铁明1 (1．新疆农业大学农学院，新疆鸟鲁木齐830052；2．新疆农业科学院分析测试中心，新疆乌鲁木齐830000； 3．新疆畜牧科学院草原研究所，新疆乌鲁木齐830000) 摘要：从13种禾草组织中分离内生细菌，研究比较不同禾草品种，不同组织中内生细菌的菌群密度和分布特点；筛 选内生固氮菌菌株，经乙炔还原法测定其固氮酶活性。结果表明，不同禾草品种的内生细菌菌群密度有较大差异， 菌群密度为8．70×104～8．06X106CFU／g鲜重。根组织中菌群密度高于叶。采用CCM培养基结合无氮选择性 865nmol／h·mL。研究结果证明从禾草中可分离到 培养基筛选获得21株内生固氮菌菌株，其固氮酶活性在8～2 具有高固氮酶活性的菌株，具有开发应用的潜力。 关键词：禾草；内生固氮菌；分离；固氮酶活性 中图分类号：Q945．13；$543．01文献标识码：A 文章编号：1004—5759(2008)05—0037—06 新疆属典型的内陆干旱气候，生态系统脆弱，环境条件严酷。加强草地等绿地建设，保护和改善生态环境，防 治土地荒漠化是保障新疆社会、经济可持续发展的重要问题[1]。禾草类植物具有根系强大，保蓄水土效果好，抗 逆性强等优良特性，是牧草和草坪草的主要种类，在饲料作物、城市绿化和生态环境保护中具有重要的作用。氮 素是植物生长最重要的营养元素，直接影响禾草的生长及草坪质量[2~3]。大面积施用化肥解决草地缺氮的问题 不仅成本高，还会引发环境污染。生物固氮每年可提供全球可利用还原态氮的60％，在解决氮素来源问题上具 辟了一条新的途径。研究表明，内生固氮菌生活在植物体内，避免了化合态氮的抑制及土著微生物的竞争，表现 出更高的固氮效率，同时还具有分泌生长素、溶磷，增强植株抗病性、抗逆境等多方面的促进植物生长的作用，在 解决禾草氮素来源，增强对环境的适应性上有巨大的潜力，显示出了良好的应用前景[8~1引。 本研究从几种禾草中分离内生固氮菌，测定其固氮酶活性，从中筛选出固氮效能高、性能稳定的内生固氮菌 株，以期为研制与应用禾草微生物接种剂，建立禾草高效固氮体系，促进禾草生长，增强抗逆性，加强新疆特殊气 候及环境条件下草地的良性生态循环提供菌种资源和技术支持。 1材料与方法 1．1材料 sudane— 13种禾草采自新疆农业大学温室栽培，校园草坪和乌鲁木齐市园林草坪。品种有苏丹草(Sorghum nse)，高冰草(Agropyron 猎狗5号，可奇斯，红象)，紫羊茅(Festucarubra)(宝瑞)、黑麦草(Lolium an— nua)(康尼，蓝宝石，优美)，偃麦草(Elytrigriarepen)。 1．2培养基及缓冲液 营养琼脂培养基(NA，g／L)[11]：牛肉膏5，蛋白胨10，蔗糖10，酵母浸膏1，pH值7．2。 28 0．2 0．1 EDTA 多碳源低氮培养基(CCM)F1z]：溶液I：KH2P04g，NaClg，K2HPO。0．8g，NazFe mg，钼 酸钠25 mL。 mg，酵母浸膏100mg，甘露醇5g，蔗糖5g，乳酸钠0．5mL，蒸馏水900 0．2