迟缓爱德华氏菌SYBR+Green+I实时荧光定量PCR检测方法的建立及其应用.pdfVIP

第 卷第 期 水 产 学 报 年 月 文章编号 迟缓爱德华氏菌 实时荧光定量 检测方法的建立及其应用 荣小军 廖梅杰 张 正 王印庚 刘智超 李 彬 王 岚 陈贵平 中国海洋大学海洋生命学院山东 青岛 中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部海洋渔业可持续发展重点实验室山东 青岛 摘要 根据克隆得到的迟缓爱德华氏菌基因序列设计并合成一对特异性引物通用性和 特异性检测结果显示所设计的引物具有良好的种间特异性和种内通用性构建含基因的 重组质粒作为标准品经过反应体系优化后建立了检测迟缓爱德华氏菌的 实时 荧光定量检测方法 结果显示该方法线性关系良好在 为 时扩增产物的熔解 曲线仅有一个单特异峰扩增所得标准曲线为 相关系数为 扩增效 率为 最低能检测到 个拷贝 应用建立的方法对人工感染的大菱鲆病样进行了检测 个被检样品均呈阳性反应证明该方法具有较好的适用性 研究表明所建立的实时荧光定 量方法具有特异敏感快速定量的优点可用于迟缓爱德华氏菌病的快速检测 关键词 迟缓爱德华氏菌 基因 实时定量 中图分类号 文献标志码 迟缓爱德华氏菌 又称迟 症浓度性关节炎和肌肉坏死等病症直接对人类 钝爱德华氏菌或缓慢爱德华氏菌是属于肠杆菌 健康造成威胁 在水产养殖过程中爱德华氏菌 科爱德华氏菌属的一种革兰氏阴性菌是目前在 病的前期往往只有少数鱼死亡一段时间后才会大 水产养殖中危害极大的病原菌 该菌呈世界性分 规模发病 因此建立水产动物迟缓爱德华氏菌 布危害较严重的地区主要有非洲美洲和亚洲 早期快速检测技术具有重要的实际意义 传统的 迟缓爱德华氏菌有着广谱的宿主范围能够感染多 迟缓爱德华氏菌检测方法需经富集培养形态特征 种淡水和海水鱼类包括大菱鲆 观察革兰氏染色生理生化反应血清学鉴定等一 牙鲆 日本鳗鲡 系列过程耗时长且效率不高 随着生物学技术的 黄 颡 鱼 发展现在常见的细菌快速检测方法主要有免疫诊 和尼罗罗非鱼 等 断方法和分子生物学方法 目前已经建立的爱德 其感染造成鱼类出血性败血症以及内脏组织的坏 华氏菌检测的免疫学技术主要有间接 和竞 死等病症最终导致患鱼死亡统称为爱德华氏菌 争快速检测法胶体金试纸快 病给水产养殖造成巨大的损失 迟缓爱德华氏菌