哈维氏弧菌外膜蛋白_i_OmpW__i_基因克隆、表达及DNA疫苗的免疫效果.pdfVIP

第 卷第 期 水 产 学 报 年 月 文章编号 哈维氏弧菌外膜蛋白 基因克隆 表达及疫苗的免疫效果 黄浦江 黄郁葱 简纪常 吴灶和 鲁义善 张雪利 广东海洋大学水产学院广东 湛江 广东海洋大学广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东 湛江 广东海洋大学广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室广东 湛江 仲恺农业工程学院广东 广州 摘要 参照 上登录的哈维氏弧菌外膜蛋白 基因序列设计引物扩增 的 开放阅读框序列分析结果显示该基因全长 将其定向克隆到原核表达载体 在大肠杆菌 中成功表达出带 的融合蛋白融合蛋白分子量约为 且主要以包涵体形式存在 优化的表达条件为 浓度 诱导时间 将纯化的融合蛋白免疫昆明小鼠制备多克隆抗体 方法检测抗体效价达 结果表明鼠抗 血清能与诱导后的重组蛋白发生特异反应提示 可 能是哈维氏弧菌的一种重要保护性抗原 为进一步研究哈维氏弧菌外膜蛋白 基因 疫苗对红笛鲷的免疫保护效果构建了真核表达重组质粒 然后将真核质 粒免疫接种红笛鲷 结果显示免疫接种后第 天在红笛鲷的肌肉 头肾肝脏和 脾脏组织中均存在质粒分布结果显示免疫接种后第 天红笛鲷上述组织均 有目的基因的表达 结果表明红笛鲷体内血清产生了抗 蛋白的高效价抗体 分析表明 疫苗免疫后红笛鲷体内表达了相应的目的蛋白并诱导产生了相 应抗体 攻毒实验结果表明免疫保护率高达 可见 可作为红笛鲷预防哈 维氏弧菌感染的有效候选疫苗之一 关键词 哈维氏弧菌 外膜蛋白 免疫原性 疫苗 中图分类号 文献标志码 哈维氏弧菌 广泛存在于海洋 主物种的不同毒力存在较大差异 致病性与胞 环境中是一种常见的革兰氏阴性杆菌可感染鱼 外产物如溶血素蛋白酶脂多糖及外膜蛋 类虾类及贝类等多种经济动物给海水养殖业造 白等有密切的关系 等 通过实验证实 成 了 巨大 的经 济 损 失 红 笛 鲷 哈维氏弧菌的毒力与细胞表面的疏水性和含铁产 是我国沿海的重要养殖鱼类之一近年 物相 关 张 晓 华 等 以 虹 鳟 来随着海水鱼类养殖密度的不断增大和环境的日 和蛙为模型动物对哈维氏弧菌可能的致 益恶化海水鱼弧菌病频繁暴发其中由哈维氏弧 病因子做了详细的比较研究发现由该菌分泌的胞 菌引发的弧菌病危害较重 因此开展弧菌病的免 外产物中的溶血素是引起鱼体致病的重要因子 疫学研究显得非常迫切 虽然哈维氏弧菌发现较