丝瓜SRAP-PCR体系建立与优化.pdfVIP

中国蓉学c量据 2009，25(04)：30—34 ChineseAgriculturalScienceBulletin 丝瓜SRAP—PCR体系建立与优化 吴 红 ，林 清 ，雷开荣 ，陈 旭。，蒋晓英 ，陶伟林 (重庆市农业科学院生物技术研究中心，重庆400055 重庆市农业科学院蔬菜花卉所，重庆400055) 摘 要 ：以丝瓜 基 因组 DNA为模 板 ，采 用 正 交试 验设 计 ，对 SRAP(sequencerelatedamplified polymorphism，序列相关扩增多态性1反应体系中的4种关键因素(dNTPs、Taq酶、引物、模板)进行优化， 建立 了适合于丝瓜基 因组SRAP分子标记的扩增体系：反应总体积 1O l，其中含Taq酶 1．0u、模板 DNA5O．00ng、dNTPs0．3mmol／L、引物0．30~tmol／L。该体系能很好地满足丝瓜基因组SRAP标记的要 求，可应用于丝瓜的分子生物学研究。 关键词：丝瓜 ；SRAP．PCR；体系优化 中图分类号：$642．4 文献标识码：A EstabHshmentandOptimizationofSRAP-PCRAmplificationSystem inLoofah WuHong，LinQing，LeiKairong，ChenXu，JiangXiaoying，TaoWeiling (ResearchCenterofBiotechnology,ChongqingAcademyofAgriculturalSciences，Chongqing400055； jm斑眦eofVegetablesandFlowers，ChongqingAcademyofAgricuhuralSceinces，Chongqing400055) Abstract：Inthisstudy，orthogonalexperimentsweredesignedtooptimizethekeyparameters(dNTPs、Taq polymerase、primer、templateDNA)ofSRAP-PCRamplificationsysteminloofah(Luffacylindrica(L．)M． Roem)．Theresultsshowedthattheoptimizedreactionsystemincluded：DNAtemplate50ng，dNTPs0．3mmol／ L．primer0．30ixmo1]LandTaqpolymerase1U inthe10xiltotalvolume．Thissystem isfitforthegenome amplificationofloofahandcanbewellusedofrthemoleculra biologicalreserachinloofah． Keywords：loofah，SRAP—PCR，system optimization 由Li和Quiros在芸苔属植物上开发 出的新型分 域横跨南北，近年来栽培面积呈扩大趋势，育种研究工 子标记技术——序列相关扩增多态性标记(sequence 作也得到深入开展，新育成品种不断出现。但是，丝瓜 relatedmaplifiedpolymorphism，SRAJP)】，目前 已在黄 的分子生物学研究进展还比较缓慢 ，迄今还没有 瓜[2-6]-,番茄阴、辣椒嘲、小 、水稻[1o】、马铃薯 【“、甘薯[13】、 SRAP标记技术在丝瓜上应用的研究报道，笔者以丝 花生 、棉花 q、西瓜 ’1、油菜 、烟草 、梨2[o1、牧草 瓜为研究材料，建立并优化了SRAP．PCR反应体系，为 [21-221 ~ 西葫芦㈤、甘蓝2[4、桃2[Sl等农作物的有关研究中使 丝瓜分子标记、基因图谱构建和相关基因的QTL定位 用，主要用于植物种质资源鉴定评价[1,15,22】、种缘进化关 打下基础 。 系嘲、遗传图谱构建0-4,13]、基因定位口^21‘、重要性状标记