医学遗传学-遗传病的诊断2.pptVIP

单体型分析法 当利用一个遗传标记不能提供可供分析的信息时，应用多个与待检测基因紧密连锁的遗传标记，结合家系分析进行基因诊断。 8. 基因诊断 8.1. 分子杂交 8.1.1. Southern印迹 单体型分析法：PKU 1 2 Ⅰ Ⅱ 1 2 3 SphⅠ 9.7 kb 7.0 kb 8. 基因诊断 8.1. 分子杂交 8.1.1. Southern印迹 4.2 kb 4.0 kb HindⅢ 8. 基因诊断 8.1. 分子杂交 8.1.1. Southern印迹 单体型分析法：PKU 1 2 Ⅰ Ⅱ 1 2 3 SphⅠ 9.7 kb 7.0 kb 斑点杂交技术的一种，用以快速筛查在等位基因之间单一核苷酸差异的常用方法。 8. 基因诊断 8.1. 分子杂交 8.1.2. ASO杂交 His Leu Thr Pro Glu Glu Lys Ser Ala CAT CTG ACT CCT GAG GAG AAG TCT GCC His Leu Thr Pro Val Glu Lys Ser Ala CAT CTG ACT CCT GTG GAG AAG TCT GCC GAC TGA GGA CTC CTC TTC AGA GAC TGA GGA CAC CTC TTC AGA 8. 基因诊断 8.1. 分子杂交 8.1.2. ASO杂交 8. 基因诊断 8.1. 分子杂交 8.1.2. ASO杂交 GAC TGA GGA CTC CTC TTC AGA GAC TGA GGA CAC CTC TTC AGA PKU 正常探针 突变探针 8. 基因诊断 8.1. 分子杂交 8.1.2. ASO杂交 利用DNA片段旁侧两个短的单链引物，在体外快速选择性扩增特异DNA片段的技术。 应用热稳定的聚合酶，通过双链DNA模板的热变性、引物退火和引物延伸的重复循环，可使目的DNA片段以指数方式增加百万倍。 8. 基因诊断 8.2. 聚合酶链式反应（PCR） 应用PCR技术扩增与待检测基因紧密连锁的RFLP遗传标记，结合家系分析进行基因诊断。 PCR-RFLP 8. 基因诊断 8.2. 聚合酶链式反应（PCR） PCR-RFLP：镰状细胞贫血（HbS） 8. 基因诊断 8.2. 聚合酶链式反应（PCR） MstⅡ: CCTNAGG βA: CCTGAGGAG βS: CCTGTGGAG 1.2 kb 0.2kb 8. 基因诊断 8.2. 聚合酶链式反应（PCR） PCR-RFLP：镰状细胞贫血（HbS） PCR-STR 应用PCR技术扩增与待检测基因紧密连锁的STR遗传标记，结合家系分析进行基因诊断。 8. 基因诊断 8.2. 聚合酶链式反应（PCR） PCR-STR：DMD（XR） DXS84 gene A B C D E 8. 基因诊断 8.2. 聚合酶链式反应（PCR） A B C D E PCR-SSCP 应用单链DNA因其碱基序列不同，会形成不同构象从而导致电泳的泳动速度改变，形成电泳泳动变位来检测有无碱基改变的技术。 8. 基因诊断 8.2. 聚合酶链式反应（PCR） 1 2 3 4 5 a b 1：正常人 2,4,5：纯合体患者 3：杂合体(2的弟弟) 左为泳动变位模式：a 正常人；b 纯合体患者 8. 基因诊断 8.2. 聚合酶链式反应（PCR） PCR-SSCP C C D1 D2 D3 D4 8. 基因诊断 8.2. 聚合酶链式反应（PCR） PCR-SSCP GAA→GAG TGT→TAT CTC→CAC 8. 基因诊断 8.2. 聚合酶链式反应（PCR） PCR-SSCP Multi-PCR 应用扩增条件相同、产物长度可分的多对PCR引物同时对基因多个位点进行分析。 8. 基因诊断 8.2. 聚合酶链式反应（PCR） Multi-PCR：DMD C 1 2 3 4 5 6 7 8 9 C 8. 基因诊断 8.2. 聚合酶链式反应（PCR） Multi-PCR：缺失型 α 地中海贫血 ζ ψζ ψα1 α2 α1 5? 3? A B C D F E 4.2 kb 3.7 kb 8. 基因诊断 8.2. 聚合酶链式反应（PCR） 系谱分析应注意的事项 染色体检查