相对和绝对定量的等量异位标签多重标记串联质谱技术在人外周血单个核细胞蛋白质组学中的应用.pdfVIP

第 28卷 第 3期 生物 医学工程学杂 志 V01．28 No．3 2011年 6月 JournalofBiomedicalEngineering June 2011 相对和绝对定量的等量异位标签多重标记串联质谱 技术在人外周血单个核细胞蛋 白质组学中的应用* 王林纤 戴 勇。 涂植光L△ 张艳亮 齐素文 1(重庆 医科大学，临床检验诊 断学教育部重点实验室，重庆 400016) 2(深圳市人 民医院，暨南大学 第二临床 医学院，深圳 518020) 摘 要 ：建立并优化人外周血单个核细胞蛋 白质组学分析所需的相对和绝对定量 的等量异位标签 (iTRAQ)多重 标记技术 ，为进一步研究奠定基础 。分离人外周血单个核细胞 (hPBMC)，抽提细胞总蛋 白，经胰酶消化后进行 iTRAQ标记和 串联质谱检测 。通过 3次重复试验 ，每次随机选取 3O个前体离子进行质谱检测 ，检测到带有 iTRAQ标记报告基 团的肽段分别为 26、28和 29个 ，标记效率为 86．7 ～96．7 ，且组间差异无统计学意义 (P 0．05)；不同蛋 白的肽段相对定量 比值的变异系数为 7．6 ～25．5 ，且组问差异无统计学意义 (Po．05)；同一蛋 白的不同肽段相对定量 比值 的变异系数为 9．3 ～ 19．1 ，且组 间差异无统计学意义 (Po．05)。结果表 明 |TRAQ多重标记 串联质谱技术可用于 hPBMC蛋 白的标记 ，且标记效率高 ，重复性和准确性好 。为进一步研究多种 自身免疫性疾病患者的 PBMC定量蛋 白质组学奠定了基础。 关键词 ：相对和绝对定量 的等量异位标签 ；人外周血单个核细胞 ；蛋白质组学 ；质谱 中图分类号 Q51；R34 文献标识码 A 文章编号 1001—5515(2011)03-0538-05 ApplicationofiTRAQMultipleLabelingandTandem MassSpectrometryin ProteomicResearchofHumanPeripheralBloodM ononuclearCells WangLinqian ‘DaiYongz TuZhiguang ZhangYanliang QiSuwen 1(KeyLaboratoryMedicalDiagnostics，MinistryofEducation。ChongqingMedicalUniversity ·Chongqing400016，China) 2(TheSecondClinicalMedicalCollege，JinanUniversity．ShenzhenPeople’5Hospital，Shenzhen518020，China) Abstract：Thispaperisaimedtoestablishandoptimizeproteomicresearchplatform usingisobarictagsforrelative andabsolutequantitation (iTRAQ)SOastofacilitatefurtherproteomicresearchofhumanperipheralbloodmononu— clearcel】s(hPBMC)．WecollectedhPBMC，afterproteinextractionandtrypsindigestion，welabeledthesamples withiTRAQ reagentsandthenSUbjectedtomassspectrometry．Intriplicates，thirtyprecursorswererandomlyse— leetedanddetected；flSaresult，26，28and29peptideswererespectivelytaggedwithiTRAQ reporterions．Thela’ belingefficie