球药隔重楼HMGR功能基因保守区序列的克隆与分析.pdfVIP

中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs 第42卷 第 6期 2011年6月 ● 药材与资源 ● 球药隔重楼 HMGR功能基因保守区序列的克隆与分析 江雪梅 ，刘学端 ，尹华群 ，李迪强 ，张于光 1．中南大学资源加工与生物工程学院，湖南 长沙 410083 2．中国林业科学研究院 森林生态环境与保护研究所，北京 100091 摘 要：目的 研究球药隔重楼次生代谢产物甾体皂苷甲羟戊酸合成途径的一个关键酶即3．羟基一3．甲基戊二酰辅酶A还原 酶 (HMGR)的基因，有助于对活性物质的合成进行调控，从而提高产量。方法 比较NCBI上公布的 11种植物 ll条HMGR 基因mRNA 的同源保守区域，设计简并引物，利用RT-PCR技术，以球药隔重楼新鲜茎总RNA反转录的cDNA为模板成功 扩增出404bp的保守区基因片段。结果 序列分析表明，球药隔重楼HMGR基因片段与其他 7种植物的一致性达到76％～ 81％，球药隔重楼 HMGR氨基酸片段与其他植物有较高的同源性，经Genbank查询为一新的cDNA。结论 通过蛋 白质特 征区、保守区以及进化树分析，初步确定该基因为HMGR基因，这是首次从药用植物球药隔重楼中克隆得到甲羟戊酸途径 关键酶HMGR的基因片段，也是百合科植物首次获得的HMGR基因。 关键词：球药隔重楼；3．羟基一3甲基戊二酰辅酶A还原酶 (HMGR)；基因克隆；RT-PCR~保守区基因片段 中图分类号：R282．12 文献标志码：A 文章编号：0253．2670(2011)06—1190-04 CloningandanalysisofHMGRgeneconservedfragmentsinParisfargesii JIANG Xue—mei，LIU Xue．duan，YIN Hua—qun，LIDi—qiang，ZHANG Yu．guang 1．SchoolofM ineralProcessingandBioengineering，CentralSouthUniversity,Changsha410083，China 2．TheRescarchInstituteofForestEcologicalEnvironmentandProtection，TheChineseAcademyofForestry,Beijing100091，China Abstract：Objective Pdrisfargesiiisanimportantmedicinalplantanditssecondarymetabolites，steroidalsaponins，synthesizedby themevalonatepathwayaretheactiveingredients．Thesutdyonthegeneofthekeyenzyme3-hydroxy一3一methyl—glutaryl-coenzymeA reductases(HMGR)inthemevalonatepathwayishelpfulfortheregulationofsteroidalsaponinssyntheses．Methods Inthebasisof degenerateprimersdesignedaccordingtomRNA homologousconservedregionsof11HMGRsrfom 11plantspeciespublishedon NCBIandtotalRNAextractedrfomtheseedlingofPfargesii，a404bprfagmentofHMGRwasamplifiedbyreversetranscription PCRtechnology,whichisanew cDNA assearchingintheGenbank．Results Sequenceanalysisshowedthattheobtainedrfagment had76％一8l％ identificationcomparedwithothersevenplantspecies．Thededucedaminoacidseqencewaspredictedtohaveawider andhigherhomoloyg withotherplants．Conclusion Proteincharacter