甘肃腐霉新记录种Pythium carolinianum的分离鉴定及rDNA-ITS序列分析.pdfVIP

第 46卷第 6期 兰州大学学报 (自然科学版) VO1．46NO．6 2010年 12月 JournalofLanzhouUniversity(NaturalSciences) Dee．2010 文章编g-：0455—2059(2010)06—0084—07 甘肃腐霉新记录种Pythium carolinianum 的 分离鉴定及rDNA—ITS序列分析 李金花， 柴兆祥 (甘肃农业大学草业学院，甘肃省作物遗传改 良与种质创新重点实验室，草业生态系统教育部重点实验室， 中一美草地畜牧业可持续发展研究 中心，兰州 730070) 摘 要：将诱饵法与组织分离法相结合，对甘肃 中部干旱地区菜豆根 围土壤 中的腐霉菌进行分离，共得 到6株腐霉菌株．通过挑单菌丝的方法获得纯培养菌系，在对纯化菌株形态特征、培养特性、生长速度 和温度的适应 范围研究 的基础上，对 编号为 18．51D的腐霉菌株培养后提取DNA，采用真核生物核糖 体基因(rDNA)转录问隔区(ITs)通用引物ITSI(5一TccGTAGGTGAAccTGcGG一3)和ITS4(5-TCCT CCGCTTATTGATATGC一3)进行PCR扩增；扩增产物直接测序并输出全序列，获得947bp的序列；将 该序列在GenBank中进行比对，用DNAStar分析软件将 同源性较高的登记菌株 的序列与l8—51D腐霉 菌株用邻接法构建系统发育树，结果发现18—51D与菌株DQ211524(Pythiumcarolinianum)和AY987038 fP．carolinianum)聚为一类．依据形态学特征和分子鉴定，将这6株腐霉菌株鉴定为卡地腐霉P． caroliniaTtU?7~．这是第一次在菜豆根围土壤和在甘肃分离到卡地腐霉P．carolinianum，为甘肃腐霉新 记录种．用平皿法测定该菌种对三科九种栽培植物的致病性，发现所有供试植物的胚根仅部分有轻微 褐变，未见对生长有明显影 响，说 明P．carolinianum对这些植物基本无致病性． 关键词：菜豆；根 围土壤；卡地腐霉；核糖体DNA—ITS；新记录 中图分类号：$432．4 文献标识码：A A new record ofPythium carolinianum in Gansu provinceand itsisolation．identification and rDNA—ITSsequenceanalysis LIJin—hua．CHAIZhao—xiang (CollegeofGrasslandSciences，GansuKeyLabaratoryofCropImprovementandGermplasmEnhancement， KeyLaboratoryofGrasslandEcosystem with theMinistryofEducation， Sino—U．S．CenterforGrazingland Ecosystem Sustainability， GansuAgriculturalUniversityjLanzhou730070，China) Abstract：TherhizospheresoilofPhaseolusFUlgarissampled fr0111themiddleareasofGansu province wereisolatedviabothbaitingandtissuemethodsand6isolatesofPythium wereobtained．Afterastudy— ingofitsmorphology)culturalcharacteristics，growthratesandadaptionstodifferenttemperaturesofthe siIlgle—hyphaedstrain18—51D，itsDNAwasextractedandPCRproductatprimer