双光子成像观测衰老对小鼠卵母细胞内DNA甲基转移酶表达的影响.pdfVIP

第32卷，第12期 光谱学与光谱分析 20 1 and December，2012 2年12月 SpectroscopySpectralAnalysis 双光子成像观测衰老对小鼠卵母细胞内DNA甲基转移酶表达的影响 田 宁1，张 露2，郑京镐1，李英2，马万云¨ 1．清华大学物理系，低维量子物理国家重点实验室，北京 100084 2．北京大学医学部人体解剖与组织胚胎学系分子细胞生物学与肿瘤生物学实验室，北京 100191 摘要量子点(QD)具有抗漂白能力强、量子产率高、激发谱宽和发射谱窄等优点，在生物荧光标记领域 有较广泛的应用。利用QD585和Hoechst 染色体，通过双光子成像同时双通道探测它们的荧光图像，获得了Dnmt蛋白表达的三维空间分布。发现老 龄小鼠卵母细胞不适合体外培养成熟：该成熟方式不仅引起老龄小鼠卵母细胞Dnmt蛋白含量的变化，而且 还改变了它们在胞质中的空间分布。这些改变可能与异常的甲基化修饰有关。 关键词双光子成像；量子点；衰老；体外成熟；DNA甲基转移酶 中图分类号：TH742；C1439文献标识码：A DOI：10．3964／j．issm1000-0593(2012)12—3175—04 DNA甲基化是常见的表观修饰作用，它与基因表达，基 引 言 因印记，染色体重塑等生理过程有关，在哺乳动物卵母细胞 生长及胚胎发育过程中有重要作用[7呷]。DNA甲基化是在 双光子成像是一种利用近红外超短脉冲激光作为激发光 Dnmt(DNA 源，实现双光子激发的成像技术。它具有光损伤性小、三维 的CpG岛上胞嘧啶的5位碳原子上增加一个甲基基团的化 分辨率高、穿透能力强、光漂白区域小，荧光收集效率高等 学修饰过程[1…。按功能和结构的不同，Dnmt主要分为维持 特点[1]。量子点(quantumdot，QD)是一种高效发光的半导 体纳米颗粒，通过调整粒子尺寸，可以使其在同一激发光下 发射出不同颜色的荧光。由于量子点的光谱特性(激发谱宽， 关蛋白转录水平下调[12|。 发射谱窄)及优良的光稳定性(Yc漂白及抗猝灭能力强)，它 结合双光子成像和量子点荧光标记技术，同时采集小鼠 已成为荧光标记生物分子的新型无机染料[2]，非常适合研究 卵母细胞内Dnmt和染色体的三维图像，进而分别在年轻与 同一细胞内多种物质的相互作用。 老龄小鼠，体内及体外成熟的卵母细胞中检测Dnmt的空间 体外成熟(in-vitromaturation，IⅥ订)是指将未成熟的卵定位及表达水平，发现老龄小鼠卵母细胞不太适合体外成 母细胞，在体外适宜条件下培养，使其成熟并具有受精能力 熟。 的技术，是研究卵母细胞体内成熟机制的理想模型，临床上 主要用于现代生殖领域。目前IVM仍存在卵母细胞体外成 1实验部分 熟率低、染色体畸变率高、受精率低等缺陷，且体外成熟卵 母细胞的发育能力低于体内成熟的情况[3“]。IVM卵母细胞1．1样品制备 的质量评估主要有两项：核成熟和胞质成熟。其中核成熟的 实验动物：7～8周龄昆明雌鼠为年轻组小鼠，40～47 vesicle breakdown， 形态学评判指标为生发泡破裂(germinal 周龄为老龄组小鼠(购买并饲养于北京大学医学部实验动物 GⅥD)和第一极体排出。然而目前胞质成熟的评估标准尚 中心)。 无定论，多从细胞质形态、细胞器分布、蛋白合成等角度入 体外成熟卵母细胞：将年轻与老龄小鼠脱颈椎处死，无 tubular 手‘5，6l。