试验三、氯化三苯基四氮唑（TTC）法测定种子活力.pdfVIP

试验三、氯化三苯基四氮唑（TTC ）法测定种子活力 一、实验目的：种子活力就是种子潜在的发芽能力。为了正确评价种子的生活力，通常测 定发芽率和发芽势，费时费力繁琐，况且对于具有休眠和硬实的种子则是无效的。因此采 用 TTC 法简单、快速、正确测定种子的活力具有重要的意义。 二、实验原理：凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都发生氧化还原反应，而无生活 力的种胚则无此反应。当 TTC 溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH 或 NADPH ）还原时，可产生红色的三苯基甲月替（TTF ），胚便染成红色。当种胚生活力下 降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化不明显，故可由染色 的程度推知种子的生活力强弱。TTC 分子量 334.8，白色，淡黄色，见光易分解。 H N N N N C Cl + 2H C + HCl + N N N N TTC 无色 TTF 红色 三、材料用具：牧草种子、镊子、刀片、染色缸、水浴锅、滤纸等。 四、测定步骤： 1、药剂配制 TTC 溶于水，pH 值在 6.5～7.5，pH=7.0 最好，浓度 0.1%～1.0%。 0.1%～0.5% ：用 于切开的种子，直接配； 0.5% ～1%:须用缓冲液，用于整粒种子染色；母液 Ⅰ：9.078g KH2PO4 、1000 ml；母液Ⅱ：9.472gNa2HPO4、1000 ml；母液 Ⅰ与母液Ⅱ以2:3 的比例混 合，然后称 1 g TTC 定溶于 100 ml 混合液，即得到浓度 1%TTC 溶液。放在阴凉黑暗处， 如溶液变红则不可再用。 2 、实验方法 先将牧草种子浸泡 3～4h ，然后放滤纸吸干水，用锋利的刀片纵向切开，使胚的主要构 造露出来，去一半测定，放在黑暗中染色 30min，染色温度一般以 25～35℃为宜。然后鉴 定结果，凡是胚染成红色的种子就是有活力的种子，不染色或染成红色小斑点的则是无活 力的种子，对于小种子在立体显微镜下观察。 五、作业：每人分别对豆科禾本科牧草的种子用 TTC 法进行生活力测定，将结果填入下表。 用染色法测定牧草种子生活力的记录表 草种名称： 测定日期 染色前的处理（水温、浸泡时间、换水次数等） 染色方法（染剂名称、浓度、染色时间、染色温度） 切种发现不能染色的种子数 投入染色的 染色结果 重复 供试种子数 生活力% 备注 空壳 腐烂 机械 虫害 合计 种子数 有生活力 无生活力 1 2 3 平均 附件：高羊茅种子纵切、横切示意图