利用噬菌体随机七肽库技术筛选人膀胱癌相关表面标志物Her2、Survivin表位模拟肽.pdfVIP

中华实验外科杂志2010年 l2月第27卷第 12期 ChinJExpSurg，December2010，Vo1．27，N(J_l · 1799 · · 泌 尿 外 科 · 利用噬菌体随机七肽库技术筛选人膀胱癌 相关表面标志物 Her2、Survivin表位模拟肽 郭正辉 黄海 曹亿 陈杰青 许可慰 江春 韩金利 黄健 【摘要】 目的 利用噬菌体随机七肽库技术筛选人膀胱癌相关表面标志物Her2、Smwivin表位 模拟肽。方法 分别以Her2、Survivin多克隆抗体为固相筛选分子，对噬菌体随机七肽库进行 3轮 牛物淘洗，随机挑选单克隆噬菌体进行酶联免疫吸附试验 (ELISA)分析检测其结合力 ，竞争抑制实 验鉴定其阳性克隆，对结合力较好的噬菌体提取DNA并测序 ，寻找比较保守的核心序列 ，合成多肽， 最后鉴定合成多肽的结合力。结果 经噬菌体随机七肽库3轮淘洗后，特异性噬菌体模拟肽得到 富集，分别挑选 Her2、Survivin20个克隆，经 DNA测序分析，Her2较保守的序列为ACTACGGCT GAGAATAATGAG，Survivin为TCTCCTCCTCATCTFTCGCAG，合成多肽，Her2为Thr—Thr—Ala— Glu—Asn—Asn—Glu(TrAENNE)，Survivin为 Ser—Pro—Pro—His—Leu—Ser—Gln(SPPHLSQ)，ELISA分析具有 良 好结合力。结论 利用噬菌体随机七肽库成功筛选到人膀胱癌相关表面标志物 Her2、Survivin表位 模拟肽，从而为今后膀胱癌多肽疫苗的研制提供 良好的基础和条件。 【关键词】 噬菌体随机七肽库；Her2；Survivin ScreeningHer2andSurvivinm imicpeptidesfrom Ph．D．_7phagedisplaypeptidelibrary GUO Zheng—hui，HUANGHai，CAO ，CHENJie—qing，XUKe—wei，JIANGChun，HANfin—li，日UANGJian． DepartmentofUrology，Sunrat—senMemorialHospital，Sunrat—senUniversity，Guangzhou510120，China Correspondingauthor：HUANGJian，Email：yehjn@yahoo．con．cn 【Abstract】 Objective ToscreenHer2andSurvivinmimicpeptidesthatwereassociatedwith bladdercancerfrom Ph．D．-7phagedisplaypeptidelibrary．M ethods Ph．D．一7phagedisplaypeptideli— brary wasbiopannedfor3roundsbyusingHer2andSurvivinpolyclonalantibodyandthenphagetiterwas detected．Enzymelinkedimmunosorbentassay(ELISA)dectionandcompetitivesupressiontestwereper— formedtodetectthebindingforceofrandom—selectedmonoclonalphages．DNA extractedrfom phageswith betterbindingactivityweresequencedandgotthebasicgroupofcoresequencethatwasappearedmoreof- tenrelatively．ThenthepolypeptidewassynthesizedandELISA detectionandcompetitivesupressiontest wereperformedagaintodetectthebindingforce．Results After3roundsofbiopanning，thetiterofphages wereincreasedgradually．Select20monoclonalplaquerfom titeringplatesofHer2andSurvivinrespective— ly