在线固相萃取液相分析血浆中的抗真菌药物（译）.pdfVIP

在线固相萃取液相分析血浆中的抗真菌药物（译） 介绍 这是一个分析未经处理的人类血浆的实例。该方法包括对追踪治疗的相关药物进行的全自动提 取，分离及定量。本文描述了采用UltimateTM 3000双梯度液相系统，在线SPE-LC-UV分析抗真菌药物。 传统方法 一般用于分析体液中追踪治疗的药物的HPLC方法都很费时，容易出错且很昂贵。因为要用手工 的预处理以去处样品中的杂质。这些常规的预处理包括： 沉淀/离心 液液萃取/蒸馏/重悬 膜过滤 离线固相萃取（SPE） 一体化样品清洗 为了达到样品高通量和全自动化并降低成本，提高全面分析的质量，例如血浆、尿液等的复杂 生物样品的清洗方法需要优化。把提取样品的清洗过程整合到全分析系统中（TAS）就能得到很大的 进步,如图1。设备和方法能保证人血浆直接进样，整合SPE的液相系统能分离、定量目标分析物。 图1. 全分析系统（TAS） 在线固相萃取液相的原理 其中一点是采用一种专门的SPE柱，选择性地从样品中萃取目标物。被截留的目标物通过反冲模 式进入相应的HPLC分析柱来分离和检测。与此同时，SPE小柱可重新平衡。SPE柱和分析柱通过一个2 位置－6通道的切换阀相连。如图2。 图2.典型的在线SPE-LC配置 UltiMate 3000 ×2 双梯度系统的On-Line SPE-LC 用于HPLC和on-line SPE的泵被整合在一个设备中 提供切换阀作为柱温箱的预选设备 通过Chromeleon® 变色龙软件控制所有设备，提供简单的方法创建和全自动的操作以及可追溯的 所有数据 图3.Ultimate 3000双梯度系统 限制通过性基质 (RAM) SPE柱是TAS的一部分。其特殊的填料叫做限制通过性基质，它们是多孔硅胶或交联共聚物，对 大分子物质形成排除屏障（如蛋白、核酸、多聚糖），小分子物质例如目标物能吸附在专一位点。 体积排阻色谱和反相色谱的结合能直接从体液中选择性地提取药物。被萃取的物质随后转入分析柱 进行分离检测。图4说明了用于on-line SPE-LC分析体液的某具有代表性的一种RAM柱的局部表面化学 特性 (LiChrospher ADS, Merck KGaA, Germany) 图4. LiChrospher ADS 的限制通过性基质的表面化学示意 设备和实验条件 设备 • Dionex 双梯度液相系统和Chromeleon 6.60色谱管理系统 • 在线过滤器: FK7400 (Recipe GmbH, Munich, Germany) • RAM SPE柱: LiChrospher ADS RP-4, 25 μm, 25 × 4 mm - 截留分子量: 15 kDa - (Merck KGaA, Germany; VWR Intl.) • 保护柱: Dionex Acclaim 120 C8, 5 μm, 10 × 4.3 mm • 分析柱: Dionex Acclaim 120 C8, 3 μm, 150 × 4.6 mm 色谱条件 •进样量: 100 μL •分馏步骤 (Pump 1): 流动相(P1) water/MeCN(98/2, v/v) ，2.0 mL/min (反冲，分离时1 mL/min) •反冲和分离（Pump 2): 流动相(P2) 0.01 M ammonium acetate and MeCN，1.2 mL/min • RAM SPE柱冲洗步骤: 流动相：water/MeCN (10/90,