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小麦萌发前后淀粉酶活力的比较 　　一、目的 　　1．学习分光光度计的原理和使用方法。 　　2．学习测定淀粉酶活力的方法。 　　3．了解小麦萌发前后淀粉酶活力的变化。 　　二、原理 　　种子中贮藏的糖类主要以淀粉的形式存在。淀粉酶能使淀粉分解为麦芽糖。 2（C6H10O5）n＋nH2O→nC12H22O11 　　麦芽糖有还原性，能使3，5- 二硝基水杨酸还原成棕色的3-氨基5-硝基水杨酸。后者可用分光光度计法测定。 　　休眠种子的淀粉酶活力很弱，种子吸胀萌动后，酶活力逐渐增强，并随着发芽天数的增长而增加。 　　本实验观察小麦种子萌发前后淀粉酶活力的变化。 　　三、器材　　 　　7．恒温水浴 　　四、试剂和材料　　 　　精确称量100 mg麦芽糖，用少量水溶解后，移入100 mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度。 　　3．pH6.9，0.02 mol／L磷酸缓冲液 100 mL 　　0.2 mol／L磷酸二氢钾67.5 mL与0.2 mol／L磷酸氢二钾82.5mL混合，稀释10倍。 　　4．1％淀粉溶液 100 mL 　　1g可溶性淀粉溶于100 mL 0.02 mol／L磷酸缓冲液中，其中含有0.0067 mol／L氯化钠。 　　5．1％ 3，5-二硝基水杨酸试剂 200mL 　　1g 3，5- 二硝基水杨酸溶于20 mL2 mol／L的氢氧化钠 溶液和 50 mL水中，再加入30g酒石酸钾钠，定容至100 mL。若溶液混浊，可过滤。 　　6．1％氯化钠溶液 300 mL 　　7．海砂5g 　　五、操作 　　1．种子发芽 小麦种子浸泡2.5小时后，放入25℃恒 温箱内或在室温下发芽。 　　2．酶液提取 取发芽第3或第4天的幼苗15株，放入乳钵内，加海砂 200 mg，加1％氯化钠溶液10 mL，用力磨碎。在室温下放置20分钟，搅拌几次。然后将提取液离心（1500 r／min）6～7分钟。将上清液倒入量筒，测定酶提取液的总体积。进行酶活力测定时，用缓冲液将酶提取液稀释10倍。 　　取干燥种子或浸泡2.5小时后的种子15粒作为对照（提取步骤同上）。 　　3．酶活力测定 　　（1）取25mL刻度试管4支，编号。按下表要求加入各试剂（各试剂须在25℃预热10分钟） 　　将各管混匀，放在25℃水浴中，保温3分钟后，立即向各管中加入10％3，5-二硝基水杨酸溶液2 mL。 　　（2）取出各试管，放入沸水浴中加热5分钟。冷至室温，加水稀释至25 mL。将各管充分混匀。 　　（3）用空白管作对照：在A500nm处①测定各管的光吸收值，将读数填入上表。 　　4．计算 　　根据溶液的浓度与光吸收值成正比的关系，即： 　　式中： 　　c为浓度； 　　A为光吸收值。 　　本实验规定：25℃时3分钟内水解淀粉释放1mg麦芽糖所需的酶量为1个酶活力单位。 　　则15粒种子或15株幼苗的 总活力单位=c酶×n酶×V酶 　　式中：c酶为酶液中麦芽糖的浓度； 　　n酶为酶液稀释倍数； 　　V酶为提取酶液的总体积。 思考题 　　1．为什么此酶提纯整个过程在0～5℃条件下进行？而测酶活力时要在25℃预保温？反应后又放入沸水浴中？ 　　2．实验结果说明什么？