UCHL1对恶性脑胶质瘤细胞缺氧适应性调控研究.doc

硕士学位论文  论文题目  UCH-L1 对恶性脑胶质瘤细胞缺氧适 应性的调控研究  研究生姓名  周  磊  指导教师姓名 专 业 名 称 研 究 方 向 论文提交日期  杨金铭 药理学 肿瘤药理 2013 年 3 月 UCH-L1 对恶性脑胶质瘤细胞缺氧适应性的调控研究  中文摘要  UCH-L1 对恶性脑胶质瘤细胞缺氧适应性的调控研究 中文摘要 目的：研究 UCH-L1 对恶性脑胶质瘤细胞缺氧适应性的影响并初步探讨其可能 的分子机制。 方法：我们使用 UCH-L1 siRNA 靶向抑制恶性胶质瘤细胞 U251 和 T98G 中 UCH-L1 的表达。在缺氧环境下，1）采用划痕法、Matrigel 法分别检测恶性胶质瘤 细胞的迁移和侵袭能力的变化；2）采用台盼蓝、克隆集落实验检测恶性胶质瘤细胞 的存活和增殖能力的变化；3）采用乳酸和葡萄糖试剂盒检测恶性胶质瘤细胞糖酵解 能力的变化；4）用 Western Blot 法检测缺氧情况下 UCH-L1 对凋亡相关蛋白表达和 HIF-1α 表达调控的影响。 结果： 1）划痕法和 Matrigel 法结果表明在缺氧环境下沉默 UCH-L1 后胶质瘤 细胞 U251 和 T98G 的迁移能力、侵袭能力明显下降，提示 UCH-L1 能促进恶性胶质 瘤细胞的侵袭和迁移；2）台盼蓝、克隆集落实验结果表明在缺氧环境下沉默 UCH-L1 后恶性胶质瘤细胞 U251 和 T98G 的存活和增殖能力明显减弱，提示 UCH-L1 有助于 恶性胶质瘤细胞缺氧环境下的增殖和存活；3）在缺氧环境下沉默 UCH-L1 后恶性胶 质瘤细胞相关凋亡蛋白 Caspase 3、PARP 的表达明显增加，提示 UCH-L1 能抑制恶 性胶质瘤细胞凋亡的发生；4）在缺氧环境下沉默 UCH-L1 表达后恶性胶质瘤细胞 U251 和 T98G 的乳酸生成量和葡萄糖消耗量明显减少，提示 UCH-L1 能促进恶性胶 质瘤细胞的糖酵解能力；5）在缺氧环境下沉默 UCH-L1 后恶性胶质瘤细胞 HIF-1α 蛋白水平明显降低，给予蛋白酶体抑制剂 MG132 和 LAC 后 HIF-1α 部分恢复，提示 UCH-L1 可能通过泛素蛋白酶体途径调控 HIF-1α 蛋白的表达；6）在缺氧环境下沉默 UCH-L1 后，加入 CHX 处理不同时间后，恶性胶质瘤细胞 HIF-1α 蛋白的表达随着时 间推移迅速减弱，提示 UCH-L1 能增强 HIF-1α 蛋白的稳定性。 结论：UCH-L1可能通过阻止HIF-1α经泛素蛋白酶体途径降解，维持HIF-1α稳定 I 中文摘要  UCH-L1 对恶性脑胶质瘤细胞缺氧适应性的调控研究  性，提高糖酵解调控能力，从而抑制细胞凋亡，进而促进缺氧环境下恶性胶质瘤细胞 的侵袭、运动迁移、增殖和存活。 关键词：恶性胶质瘤；UCH-L1；HIF-1α；糖酵解；细胞存活  作  者：周 磊  指导老师：杨金铭  教授  II  张  丽  讲师 UCH-L1 regular the adaptation to hypoxia of glioblastoma multiforme cells  Abstract  UCH-L1 regular the adaptation to hypoxia of glioblastoma multiforme cells Abstract Objective: To investigate the effects of UCH-L1 on viability and malignant features of glioma cells under hypoxia, and to explore the molecular mechanisms involved. Methods: The expression of UCH-L1 in glioma cells U251 and T98G was silenced  by UCH-L1-targted siRNA.  Under hypoxia condition, 1) the invasion of glioma cells was assessed by wound-healing assay and Matrigel invasion assay; 2) the cell proliferation was assessed by clonogenic assay; cell viability was assessed by trypan blue assay; 3) glycolysis was assessed using the lactate and glu