疟原虫的镜检技术-山东省寄生虫病防治研究所.pptVIP

疟原虫的镜检技术 山东省寄生虫病防治研究所 各位领导、专家、同志们： 疟疾流行于热带、亚热带及温带边缘地区，是重要蚊媒传染病，现有107个国家，约32亿人口受到疟疾传播的威胁，尤其是非洲最为厉害，特定于每年4月25日为非洲疟疾日。考虑疟疾的严重危害，WHO又将该日定为世界疟疾日。 2008年全国疟疾日宣传口号和主题信息 疟疾的实验室诊断 1.病原学诊断：显微镜血涂片检查结果阳性；这种镜检确诊最可靠。 2.免疫学诊断：（1）循环抗原的检测 （2）循环抗体的检测 3.分子生物学技术：PCR和DNA探针已应用与疟疾的诊断。 分子生物学、血清学技术发展迅猛，但是确诊疟疾的“金标准” 仍然是病原学诊断显微镜检查疟原虫。 血 检 疟 原 虫是确诊疟疾最可靠的方法 20世纪以来，随着显微镜的不断改进和染色方法的的不断完善，使显微镜检查疟原虫的方法成为疟疾病原学诊断的重要手段。凡是疟疾，最终定能查到疟原虫，不存在没有疟原虫的疟疾。显微镜检查是唯一可鉴别4种疟原虫的方法；因此下面我重点介绍一下疟原虫的镜检技术。 疟原虫的镜检技术 1. 血膜制作与染色。 2. 厚、薄血膜中间日疟、恶 性疟各期疟原虫的形态结构及其鉴别要点。（王用斌大夫主讲） 3. 小结、镜检示教及读片练习。 血膜的制作（取血时间） 采血时间 现症病人和流调普查时可不考虑取血时机。但在诊断或需要某期疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。 间日疟在寒热发作期，外周血中主要可见环状体期；发作后数小时（h），见大滋养体期，形态较易辩认，为诊断的有利时机；发作36-48h，可检出裂殖体；发作1-2次后，配子体出现较多。 恶性疟较理想的取血时间是在发作后至20h内取血，初发患者退热后常查不到原虫。 血膜的制作（取血操作） 在制作血片前，首先要核对患者的姓名、年龄和住址。 取血部位和血量 采血部位和方法：采血部位一般人为耳垂，指头；一人一针，常规消毒、采血。 耳垂或无名指，通常在耳垂取血，先用75%酒精棉球消毒取血部位，待酒精干后，用左手拇指和食指紧捏耳垂上方或无名指指尖，右手持消毒针迅速刺入皮肤，不宜过深或过浅。然后用右手中指轻轻挤压出血。厚血膜血量约一粒大米（即火柴头）大小。 血膜的制作 用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂呈薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂成圆盘，称厚血膜。 薄血膜的制作 薄血膜 用推片一端边缘的中点从取血部分①取约1～1.5微升的血量（相当于1/4火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，并形成25～350夹角，待血液向两侧扩展约② 2cm～2.5cm宽时，均匀而迅速地从右向左推成舌状薄血膜（约2.5cm长）。推制时速度要均匀，血滴大小、推片与载玻片之间夹角大小及展开血膜的速度快慢等常影响血膜的厚薄。制成的薄血膜应在玻片上形成平铺的血细胞，细胞之间互相接触而不相互重叠。③薄血膜外观：舌状厚薄均匀，无划痕，④位于玻片1/2～1/3处。 厚血膜的制作 厚血膜 用推片的左下角，从取血部位刮取①约4～5微升血量（相当于火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋转，转2～4圈，涂成②直径0.8～1cm大小圆形厚血膜(厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到5～10个自细胞为宜)，③厚血膜的位置，位于玻片右1/3处。④厚血膜外观：圆形厚薄均匀，无划痕。过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求。 厚薄血膜的标准 ●厚血膜血量适宜，不宜过多或过少。 ●薄血膜平整，无皱折和空泡，红细胞单层排列。 标准的疟疾厚薄血膜位置 全国疟疾镜检知识与技能竞赛 血片制作和染色质量评价标准 好血片制作质量: 厚血膜：血量 4.0～5.0ul,位置 玻片右1／3稍偏右,直径 0.8～1.0cm，外观 圆形厚膜均匀。 薄血膜：血量 1.5～2.0 ul，位置 玻片1／2～1／3处，外观 舌状厚薄均匀；染色质量 外观兰紫色；清洁度 外观光洁无油灰。 全国疟疾镜检知识与技能竞赛的 竞赛内容及分值比例1.理论知识竞赛内容为：疟疾病原和诊断基本知识。包括：疟原虫生史，血片制作、染色、镜检操作理论，显微镜使用与维护知识。2.技能竞赛内容为：制片染色和镜检读片。包括：厚、薄血片的制作和染色；疟原虫的显微镜镜检，确定阴阳性和虫种，定量计数以及显微镜的使用与维护。3.分值比例：每位选手满分100分，其中理论竞赛20分，技能竞赛80分；技能竞赛中，制片染色15分，镜检读片60分，显微镜使用与维护5分。 将来咱们省内竞赛内容及分值比例参考该标准。 血膜的制作 血膜编号