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文化素质教育课程 “ 生命科学导论” 实验 果蔬农药残留的快速测定 果蔬农药残留的快速测定 一、我国果蔬农药残留超标的现状及危害 目前，我国果品蔬菜受化肥、农药污染十分严重，因误食有残留农 药的果蔬中毒事件屡屡发生。据有关部门统计每年实际发生急性食物中 毒至少有20-40万人。而慢性中毒不易被发现者不计其数。 农药残留主要是有机物（有机磷和氨基甲酸酯类），化肥残留主要 是氮肥。这些残留物有很多是强致癌物，在人体内长期蓄积滞留引发慢 性中毒，严重损害消费者的身体健康，已引起人们的普遍关注。 二、 实验目的 了解快速检测果蔬中农药残留的基本原理，掌握农药残留快速测试 仪测试样品的方法。另一方面是进一步增强食品安全意识。 三、 实验原理 毒理学原理：有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制体内胆碱脂酶 的生理活性。胆碱脂酶负责及时将体内多余的乙酰胆碱分解为 乙酸和胆碱，并且对乙酰胆碱的催化作用具有高度的专一性。 在体内该酶活性受到抑制后，神经传导便受阻，致使人和动物 神经麻痹乃至死亡。农药残留快速检测方法应用了该毒理学原 理，从敏感性酶源中提取胆碱脂酶作为检测试剂，以乙酰胆碱 为底物，测试胆碱脂酶与果蔬样品接触前后酶催化活性的变化。 酶活性抑制程度的大小与农药的残留毒性成线性相关，因此， 农药残留毒性可以用酶活性的抑制率来衡量。 乙酰胆碱+非有机磷和氨基甲酸酯类农药或无农药 酶活性不被抑制 底物 酶 分解产物 显色剂 黄色溶液 乙酰胆碱+有机磷和氨基甲酸酯类农药 酶活性 受抑制 底物 酶 无分解产物 显色剂 无色溶液 少量分解产物 显色剂 浅黄色溶液 实际测试中，仪器用紫色光动态地测试黄色化合 物溶液的光度变化，其变化的速度表示了溶液中酶活 性的大小。对比酶试剂与果蔬样品接触前后的活性变 化，计算酶活性的抑制率。以酶活性的抑制率来衡量 农药残留毒性。 抑制率计算: X= AC-AS AC AC (对照3分钟后与3分钟前吸光度之差) AS(样品3分钟后与3分钟前吸光度之差) 如果抑制率70%,合格 如果抑制率=70%,不合格 四、 实验器具、材料和试剂： （一）材料：蔬菜、水果 （二）试剂 1 缓冲液、 2 底物、3 显色剂、 4 酶 以上试剂由福建省测试技术研究所提供。按试剂包装盒 内使用说明的要求来配置、使用和储藏。 （三）器具及其使用 电子天平、快速移液枪、移液管、吸耳球、三角烧瓶、 专用反应瓶、比色皿、滤纸等。 对照处理步骤： 在反应瓶中加入缓冲液3ml、显色剂50ul、酶200ul 37oc培养20分钟 于反应瓶中加入 底物50ul，晃动几下迅速倒入比色杯，放入仪器中对照组 位置，和样品同时检测。 每台仪器的对照组只需1组人员在做样品处理时做即可。 其余组人员只需做样品处理。 样品处理步骤： 取2g果蔬样品（叶菜剪成1cm见方的小片，瓜果取1cm 见方的横截面）放入三角瓶中，加入10ml缓冲液，振荡提 取2分钟后,上清液即为待测样品液。 在反应瓶中加入待测样品液3ml、显色剂50ul、酶200ul 37oc培养20分钟 于反应瓶中加入 底物50ul，晃动几下迅速倒入比色杯，放入仪器中样品组 位置，和对照组同时检测。 五、 操作步骤 五、 操作步骤 1. 开机：盖好样品池盖，打开仪器电源，仪器自检，预 1. 开机：盖好样品池盖，打开仪器电源，仪器自检，预 热30分钟。 热30分钟。 2. 按“功能键”选择“农药残毒快速检测”功能 2. 按“功能键”选择“农药残毒