表皮生长因子对体外长期孵育保存的人胎胰岛的支持作用.docVIP

表皮生长因子对体外长期孵育保存的人胎胰岛的支持作用 【关键词】 尿抑胃素 　　【Abstract】 AIM: To investigate the effects of epidermal growth factor (EGF) on the proliferation and secretion of human embryonic pancreatic islets in vitro. METHODS: Islets were isolated from pancreases of twelve human embryos and cultured in RPMI 1640 medium containing EGF (study group) or without EGF (control group). The percentage of islet beta cells was detected. The insulin content in the media, islet cells and islet beta cells insulin release were measured. RESULTS: By the end of culture, the percentage of islet beta cells was significantly higher in study group compared with that in control group. The insulin content of media and islet cells release was significantly higher in study group compared with that in control group. CONCLUSION: Results indicated that the addition of EGF to the media prolongs the survival time of islet cells and promote the proliferation and secretion of islet cells. 　　【Keywords】 islets of langerhans;preservation, biological;epidermal growth factorurogastrone 　　【摘 要】 目的： 研究表皮生长因子（EGF）对促进人胎胰岛增殖与分泌功能.方法: 12个人胎胰岛分别在含有EGF（实验组）和不含有EGF（对照组）的培养基中孵育，观察胰岛B细胞的分布，测定培养基中和细胞内胰岛素浓度和胰岛素释放量.结果: 培养结束后实验组胰岛B细胞明显高于对照组；培养基和胰岛B细胞中胰岛素释放量实验组高于对照组.结论: 培养液中加入EGF能延长胰岛细胞存活期、促进胰岛细胞增殖和分泌功能. 　　【关键词】胰岛；保存，生物学；表皮生长因子尿抑胃素 　　0 引言 　　为了有足够数量的健康胰岛供给临床移植使用，国内外都在积极研究长期保存胰岛的方法［1,2］.经典的深低温保存方法，需要较贵重的设备，操作繁杂，复苏后胰岛的失活率＞30%；孵育保存的方法胰岛难以长期存活，但只能维持1 mo，最多达5 mo［3］，胰岛细胞的调亡在所难免.我们研究了表皮生长因子（epidermal growth factor）具有促进人胎胰岛的增殖分泌作用.通过观察胰岛细胞的形态，测定细胞内胰岛素和胰岛释放量，以及胰岛组织的存活期，探讨更有意义的保存胰岛的方法. 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 EGF购自美国Sigma公司，RPMI1640培养液、人血清购自北京帮定医药公司.百级净化实验室内，所有操作在洁净工作台进行. 　　1.2 方法 　　1.2.1 人胎胰岛的获取 平均胎龄21周的人胎胰12例.经4℃无菌Hanks液漂洗，去除胰腺包膜、血管、胰管，剪为1 mm大小的碎块，再次漂洗后置于培养瓶内. 　　1.2.2 孵育条件 RPMI1640培养液中加入80 mL#12539;L-1同型人血清、丁胺卡那霉素100 u#12539;mL-1；培养箱中37℃, 50 mL#12539;L-1 CO2培养；隔日更换1/3培养液，共孵育14 d. 　　1.2.3 分组 12个人胎胰岛随机分为实验组和对照组.实验组：表皮生长因子（EGF），100 ng#12539;mL-1约1 mL加入上述孵育胰岛14 d的培养瓶内，共6瓶.每次更换培养液时均按此浓度