蒽酮－硫酸比色法测定乌龙茶多糖的条件研究.pdfVIP

A(、AI) M I( }()RUM 翻錾 麓箨 04％葸酮一硫酸于5支置于冰浴的试管中，混匀最适温度加热一 3．2显色温度的选择 定的时间，冰水冷却后于最大吸收波长处比色 “。 图2为不同温度下葡萄糖标准液与葸酮一硫酸反应结果。 23．6显色剂用量 由图中可知，随着反应温度的升高，吸光值有急剧增大的趋 取8支试管按总体积相同和总体积不同进行编号，蒽酮浓度 势，在90~C～100~C内吸光值变化相对平缓，选择沸水浴为最 为0．2％，按照下表加样进行反应，沸水浴反应 lOmin，冷却至室 佳显色温度。 温，在适宜时间内最大吸收波长下比色…1。 2．3．7显色稳定性 精密吸取50btgm／L葡糖糖标准液lmL于试管中，在冰水浴中 加入3mL蒽酮溶液，在确定的最适温度下加热反应后冷却至室 温。取出冷却至室温 ，分别放置3min、5min、7min、lOmin、15min、 20min 25min 、 、 30min后，以蒸馏水代替样液，最大波长下测定 吸光度”。 2．3．8标准曲线的制备 精密吸取葡萄糖标准液0、0．1、0．2、0．3、0．4、0．6、0．7、0．8、 温度CC) 0．9mL于9支试管中，加蒸馏水补充到lmL，在冰水浴中加入3mL 图2显色温度对吸光值的影响 0-2％葸酮溶液，摇匀，置于沸水浴下加热10rain中，取出自来水 3_3显色时间的选择 冷却至室温，放置 3min后，以蒸馏水代替样液做空白，在波长 图3为不同时间下葡萄糖标准液与蒽酮一硫酸反应的试验结 560nm下测定吸光值。以葡萄糖含量为横坐标，吸光值为纵坐标 果。由图中可知，随着加热H1,1~1延长，在 lOmin内，吸光值呈增 绘制标准曲线，并回归出标准曲线方程。 大趋势，加热 lOmin吸光度呈下降趋势，但变化不明显，所以选 2．3．9精密度测定 择 lOmin为最佳反应时间。 取5份 1mL茶多糖溶液于5支试管中，在冰水浴中加入3mL 蒽酮溶液，摇匀，置于沸水浴中加热 lOmin，取出自来水冷却至 室温，放置3min后，以蒸馏水代替样液做空白，在波长560nm下 读取吸光值” I。 2．3．10加标 回收率测定 分3组，每组做3份平行样，均取1lnIJ茶多糖样液于试管中， 在冰水浴中加入3mL蒽酮溶液，摇匀，置于沸水浴中加热lOmin， 取出冷却至室温，放置3rain。以蒸馏水代替样液做空白，在波长 560nm下读取吸光值。分别加入40~gm／L、50~tg／mL、60~tgm／L标 准葡萄糖液 1．0mL，测定吸光值，计算回收率。回收率= (加标 试样测定值 试样测定值) ／加标量 ×100％L，1。 图3显色时间对吸光值的影响 3结果与分析 3．4显色剂浓度的选择 3．1测定波长的选择 图4为蒽酮一硫酸溶液浓度对吸光值关系曲线，随着蒽酮一硫 图1为茶多糖、葡萄糖、木糖、岩藻糖吸收波长图。从扫描 酸浓度增大，吸光值先呈增大趋势后缓慢减小，当蒽酮一硫酸溶 结果看，茶多糖在564nm有最大吸收峰，木糖和岩藻糖糖的吸收 液浓度为0-2％时吸光值最大，所以选择O．2％蒽酮一硫酸浓度为 峰分别在600nm和572nm，葡萄糖吸收峰在557nm。由于茶多糖 最佳反应浓度。 的吸收峰与葡萄糖的较为接