植物组织电极生物材料固定新技术研究.docVIP

溶胶-凝胶植物组织生物传感器研究 李敏健 蔡沛祥* 中山大学化学与化学工程学院 广州 510275 摘要 本文将溶胶-凝胶与植物组织液汁混合,实现了对天然存在的酶的固定化,由此形成生物传感器的敏感膜.利用涂滴于铂盘电极表面的Nafion膜提高传感器的选择性,制备成Nafion-苹果汁-溶胶-凝胶电催化型多巴胺生物传感器.采用循环伏安法和线性扫描伏安法考察了传感器的电化学特性,采用差示脉冲伏安法对多巴胺进行定量分析,线性范围为2×10-6～1×10-4mol/L,检出限为8.0×10-7mol/L.该传感器制备方法简单,灵敏度高,且具有良好的选择性.结果表明,所提出的关于生物材料固定新方法可行,与传统方法相比具有特色. 关键词 溶胶-凝胶,植物组织,酶电极,生物传感器,多巴胺 中图分类号:0629 文献标识码:A 溶胶-凝胶具有三维网络结构,其孔径大小可人为调控,且实验条件温和,具备微水环境的网络结构,很适合作为生物分子的载体.因此,溶胶-凝胶是对生物分子固定化的优良材料.近年在生物传感器研究领域中很受重视[1-4].其中目前国内外研究最多的是利用溶胶-凝胶对酶进行包埋,研制成各种酶电极用于测定葡萄糖[5]、过氧化氢[6]、氨基酸[7]等.文献上的酶电极是利用纯酶进行研制,纯酶提取的工艺复杂,价格昂贵,应用上受到限制.天然植物中存在丰富的酶源,如果能利用这种价廉物美、取之不尽的生物材料制作传感器,就很有实际意义.但目前尚未见国内外文献有关于采用溶胶-凝胶技术固定天然植物组织中的酶制成传感器的报道.本文提出把植物组织液汁与溶胶-凝胶结合制备生物传感器的方法,无需对酶分离提取即可实现对植物组织中酶的固定化,研制成对神经递质多巴胺具有选择性响应的电流型生物传感器,通过对实际样品的测定,证实本方法的可行性. 1 实验部分 1.1 仪器与试剂 CHI 750A型电化学工作站(上海辰华仪器公司);超声波清洗器(明珠电器有限公司) 正硅酸乙酯(TEOS, Aldrich公司);Triton X-100(Research公司);Nafion-117(质量分数为5%的乙醇溶液,Fluka公司);盐酸多巴胺(DA, Sigma公司);盐酸多巴胺注射液(江苏林海药业有限公司制造分公司);盐酸肾上腺素注射液(EP,广州明兴制药厂);重酒石酸去甲肾上腺素(上海禾丰制药有限公司);抗坏血酸(维生素C药片,AA,广东华南制药厂);0.1mol/L Na2HPO4-0.1mol/L KH2PO4缓冲溶液(PBS, pH=7.4)为测试底液;所用试剂均为分析纯,实验用水为二次蒸馏水. 1.2 二氧化硅溶胶-凝胶的制备 将60μL TEOS、410μL水、12μL 0.1mol/L HCL和20μL Triton X-100混合,室温下超声振荡1h,使其形成均匀澄清的溶胶,然后室温放置2～3h.使用前用0.01mol/L NaOH调至pH＝7.4. 1.3 多巴胺传感器的制备 将铂盘电极(ф1mm)在金相砂纸上打磨抛光,依次在HNO3(1:1)、丙酮和双蒸水中超声清洗15min,清洗后的电极置于室温下晾干备用.用微量注射器将5μL含质量分数为5% Nafion的乙醇溶液滴涂于电极表面,室温下晾干备用.按一定比例将苹果汁与上述溶胶混合,超声振荡均匀.用微量注射器吸取5μL苹果汁溶胶-凝胶，滴涂于已经Nafion修饰的铂盘电极表面,室温下晾干待用. 1.4 实验方法 采用三电极系统,以所研制的多巴胺传感器为工作电极,饱和甘汞电极为参比电极,铂丝电极为对电极;以0.1mol/L Na2HPO4-0.1mol/L KH2PO4缓冲溶液(PBS, pH=7.4)为测试底液;采用循环伏安法和线性扫描伏安法研究传感器的电化学特性,采用差示脉冲伏安法对DA进行定量分析.除另有说明外,电位扫描的范围是0.6V～-0.2V,扫描速度是100mV/s,多巴胺溶液的浓度是1.05×10-3mol/L;进行定量分析时,预先在0.6V下停留30秒才进行电位扫描. 2 结果与讨论 2.1 酶的催化作用及传感器的电化学特性 用Nafion-苹果汁-溶胶-凝胶修饰电极和苹果汁-溶胶-凝胶修饰电极对多巴胺溶液进行循环伏安法电位扫描时,得到氧化还原电流峰(图1a,b);而不含植物组织的溶胶-凝胶电极和裸电极所产生的i-E曲线显得平缓(图1c,d);用Nafion-苹果汁-溶胶-凝胶修饰电极对PBS底液进行扫描时得到的i-E曲线也显得平缓(图1e).说明了苹果组织中的酶确实对多巴胺的电化学过程起催化作用;Nafion膜和溶胶-凝胶膜负电性的结构也有利于与多巴胺的接触,使传感器对多巴胺的催化作用增强. 植物组织中含有多酚氧化酶,它