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专题五 课题1：DNA的粗提取和鉴定 主备：吴国安 辅备：金俊 教学目标： 1、知识与技能 理解DNA的理化特性及根据其理化特性而提取和鉴定的原理 2、过程与方法 （1）初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法。 （2）在对实验原理、步骤的理解和分析过程中发展学生的科学思维。 3、情感、态度、价值观 在科学实验过程中培养学生严谨比较细致、实事求是的科学态度 教学重点 DNA的粗提取与鉴定方法及其相关原理 教学难点 DNA的粗提取与鉴定方法及其相关原理 课时安排： 1课时 教学过程： 开门见山：[来源:学科网] 本实验的目的是提取DNA和DNA的鉴定，其中提取DNA是本实验的重点和难点。 提出问题：“DNA主要存在于什么结构上？”“如何提取DNA？”“选什么材料好？” 达成共识： NaCl 2mo1/L NaC1 0.4mo1/L[来源: NaC1 0.015mo1/L DNA 最大 最小 变大 蛋白质 解聚 最大 变小 填表2： DNA 蛋白质 杂质 95%酒精 不溶 可溶 可溶 1、选适宜材料：选动物细胞，易打破细胞结构[来源: 2、破坏细胞膜、核膜结构，得核物质。 3、将DNA与蛋白质等物质分开，得DNA 4、去掉DNA中杂质，提纯DNA。 探究实验原理： 填表1： 通过对实验原理的预习，表格的比较，使学生明确了各溶液的用途，保证理解实验。 简述DNA提取实验步骤[实验设计一] 实验设计思路： 鸡血细胞液①aDNA 释放 ②bDNA与蛋白质的分离 ③cDNA析出④dDNA浓缩（提纯） 获得鸡血细胞核物质：提核物质→溶解→析出→溶解→析出 实验步骤： 引导学生讨论、回忆并回答目的①~⑨。 ①防止血凝。 ②加速血细胞破裂。 ③溶解DNA。 ④使2 mol/L的NaCl溶液稀释至0.14 mol/L，促DNA最大限度地析出。 ⑤使含DNA的黏稠物被留在纱布上。 ⑥使含DNA的黏稠物尽可能多地溶于溶液中。[来源:Z.xx.k.Com] ⑦除去含DNA的滤液中的杂质。 ⑧提取DNA。 ⑨A：出现蓝色。B：无变化 讨论与结论： 讨论提纲，供学生讨论。 （1）DNA粗提取过程中的关键是哪几步？ （2）提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液中的上清液？ （3）DNA的直径约为2 nm，实验中出现的丝状物的粗细是否表示一个DNA分子直径的大小？ 归纳总结。 （1）a．提取鸡血细胞的核物质。应用低渗原理和机械搅拌，可得到最大量的DNA。 b．析出DNA黏稠物。加蒸馏水要慢，搅拌要轻。 c．沉淀DNA时，必须用冷酒精。 （2）提取DNA，去除杂质是关键。由于上清液是血液中的血浆部分，不含DNA，所以要除去（含蛋白质）。 （3）实验中出现的丝状物是肉眼可以观察到的，这种丝状物的直径要比DNA分子的直径2 nm大许多倍，所以实验中出现的丝状物并不表示一个DNA分子的直径。 实验结论：细胞中有DNA，DNA遇二苯胺试剂在沸水浴中变蓝色。 补充知识： 1、鉴定DNA的其他方法 用紫外灯照射法鉴定DNA效果很好。具体鉴定方法如下。 1．配制染色剂。用蒸馏水配制万分之五的溴化乙锭（EB）溶液。 2．将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上，再滴一滴EB溶液染色。 3．将蜡纸放在紫外灯（260 nm）下照射（暗室中），可见橙红色的萤光（DNA的紫外吸收高峰在280 nm处）。 2、DNA粗提取与鉴定的另一种方法 1．材料用具 新鲜菜花（或蒜黄、菠菜）。 塑料烧杯，量筒，玻璃棒，尼龙纱布，陶瓷研钵，试管，试管架，试管夹，漏斗，酒精灯，石棉网，三角架，火柴，刀片，天平。 研磨液，体积分数为95%的酒精溶液，二苯胺试剂，蒸馏水。 2．方法步骤 A．DNA的粗提取 （1）准备材料：将新鲜菜花和体积分数为95%的酒精溶液放入冰箱冷冻室，至少24小时。 （2）取材：称取30 g菜花，去梗取花，切碎。 （3）研磨：将碎菜花放入研钵中，倒入10 mL研磨液，充分研磨10 min。 （4）过滤：在漏斗中垫上尼龙纱布，将菜花研磨液滤入烧杯中（有条件的学校可将滤液倒入塑料离心管中进行离心，用1000 r/min 的旋转频率，离心2~5 min；取上清液放入烧杯中）。在4℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液。 （5）加冷酒精：将一倍体积的上清液倒入两倍体积的体积分数为95%的酒精溶液中，并且玻璃棒缓缓地轻轻搅拌溶液（玻璃棒不要直插烧杯底部）。沉淀3~5 min后，可见白色的DNA絮状物出现。用玻璃棒缓缓旋转，絮状物会缠在玻璃棒上。 B．DNA的鉴定 （1）配制二苯胺试剂：取0.1 mL B液；滴入到10 mL A液中，混匀。 （2）鉴定：取4 mL DNA提取液放入试管中，加入4 mL二苯