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中国老年学杂志2010年 12月第 30卷
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APP基因真核表达载体的构建及其在 SH—SY5Y细胞中的稳定表达
孙立伟 姜 锐 (北华大学生命科学研究中心，吉林 吉林 132013)
[摘 要] 目的 构建淀粉样前体蛋白(APP)基因真核表达载体，转染SH—SY5Y细胞，建立稳定转染细胞系。方法 从质粒pcDNAs．APP中经
PCR扩增出APP基因，利用 DNA重组技术将其插入到真核表达载体pcDNA3．1(+)中，经酶切和测序鉴定后，脂质体转染法转染 SH—SY5Y细胞，通
过G418选择培养，建立稳定转染细胞系，通过印迹法 (Western blot)检测APP的表达。结果 pcDNA3．1(+)一APP重组体经PCR扩增后片段大小约
为2300bp，与预期相同。测序结果与 目的序列相同，重组体载体构建成功。Western印迹检测到SH．SY5Y细胞中APP的表达。结论 成功构建
pcDNA3．1(+)一APP真核表达载体并稳定转染SH—SY5Y细胞，成功表达了目的基因，为进一步研究阿尔茨海默病分子学机制奠定了基础。
[关键词] APP；真核表达载体；阿尔茨海默病
[中图分类号] Q291 [文献标识码] A [文章编号] 1005-9202(2010)23-3504-03
ConstructiontheeukaryoticexpressionvectorofAmyloidbeta-proteinprecursoranditsstableexpression in SH -·SY5Y cellline
SUN Li-W ei．JIANG Rui．
BeihuaUniversity，Jilin132013，Jilin，China
A【bstract】 Objective ToconstructtheeukaryoticexpressionvectorofAmyloidbeta—proteinprecursor(APP)andtransfectinto
SH—SY5Y cel1．toestablishthestablecellline．M ethods TheAPPgenewasamplifiedbyPCR from plasmidpcDNAs—APPandwascloned
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