H5N1亚型禽流感病毒HA基因在昆虫细胞中的表达及其生物活性鉴定.pdfVIP

维普资讯 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology，2007，27(3)：42-46 HSNI亚型禽流感病毒HA基因在昆虫细胞 中 的表达及其生物活性鉴定水 张晓霁 刘 明”刘春国 杨 涛 张 云 (中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室 哈尔滨 150001) 摘要 经RT-PCR扩增了I-ISN1亚型禽流感病毒血凝素基因(HA)片段 ，限制性内切酶酶切后将 其克隆到 pFastBacHTA杆状病毒转座载体，经酶切鉴定及测序，筛选 出阳性重组转座载体 pFastBac-l-I5。将pFastBacH5转化含有杆状病毒穿梭载体(bacmid)的DH10Bac感受态细胞，通过 蓝白斑筛选和PCR鉴定获得重组杆状病毒穿梭载体rBacmid-l-15。rBacmid-l-15在脂质体介导下转 染st9昆虫细胞，SDS蛋 白电泳、Westernblot、血凝试验和血凝抑制试验分析表明：分子量约 63kDa重组血凝素蛋 白(rl-I5)在 昆虫细胞中实现了高效表达。rl-I5具有血凝活性，而且其血凝 活性能够被HSN1禽流感病毒高免血清所抑制；rH5免疫鸡诱导产生针对H5N1禽流感病毒亚型 特异的血凝抑制抗体，说明表达的重组蛋白具有与天然蛋 白相似的生物活性。 关键词 禽流感病毒 血凝素基因 杆状病毒 表达 中图分类号 Q786 高致病性禽流感 (hishlypathogenicavianinfluenza， 非三大洲 14个 国家首次报告在其境 内发生禽流感，世 HPAI)是由A型流感病毒中的一些 H5和 H7亚型病毒 界卫生组织就此发出警告，禽流感病毒随候鸟迁徙正 引起禽类的一种以全身感染、高发病率和高死亡率为 在全球扩散，防控形势严峻。 特征的烈性传染病，已被世界动物卫生组织 (O1E)列为 流感病毒 目前存在 16个 HA亚型和9个 NA亚 A类疫病，我国也将其列为一类动物传染病。 型，众多的血清亚型是其遗传变异频繁的结果，流感病 在禽流感 (AI)发现的 100多年来，世界各地都有 毒在一定的选择压力的作用下变异速度很快，造成不 特定毒株引起AI爆发和流行，给养禽业造成了巨大的 同血清型毒株问缺乏交叉保护性。尤其是病毒的两种 经济损失。1997年5月香港首次发生了I-ISN1亚型禽 表面蛋白血凝素 (HA)和神经氨酸酶 (NA)变异最快， 流感突破种问屏障直接感染人并致死的事件… ，2004 HA是流感病毒最重要的表面抗原，它能与细胞表面病 年亚洲多个国家暴发 I-ISN1亚型的HPAI，并且在越南 毒特异性受体结合、介导病毒外膜与细胞内小体膜融 和泰国也出现了I-ISN1亚型禽流感病毒感染人并致人 合释放病毒核衣壳进入胞浆，以及刺激机体产生中和 死亡事件，因此许多科学家认为 I-ISN1亚型禽流感病毒 抗体 J。H5亚型禽流感病毒的HA蛋白上含有至少5 不仅可以对养禽业造成毁灭性的打击，而且给人类健 个抗原位点，每个位点都能产生保护性抗体 J，仅含有 康带来严重威胁。目前各国政府都积极采取各种措施 HA蛋白的亚单位疫苗能产生 良好的保护力说明了这 来控制禽流感，但是 I-ISN1亚型禽流感病毒流行的地理 一 点，目前各种禽流感疫苗也都主要是针对 HA。因此 范围仍在不断扩大。2006年初以来，伴随着候鸟的迁 本实验通过杆状病毒系统表达血凝素蛋白来检测抗 徙，I-ISN1亚型禽流感病毒传播区域继续扩大，欧、亚、 体、制备单因子血清及为禽流感病毒基因工程亚单位 收稿 日期：2006-07-26 修回日期：2007-01-05 疫苗的研制奠定基础 。 ·国家 “863”计划资助项 目(2003KA241110)，国家 “十五”科技攻 关资助项 目(2004BA519A19-4) ··通讯作者，电子信箱：liuming04@126．con