食品功能microRNA富集与制备的研究.pdf

谨以此论文献给一直关怀与支持我的导师、朋友 及家人! --------贾蕾敏英文缩略词表 英文缩写 英文缩写 英文缩写 英文缩写 英文全称 英文全称 英文全称 英文全称 中文全称 中文全称 中文全称 中文全称 3 ’U T R 3 ’u n t r a n s l a t e d r e g i o n 3 ’非翻译区 m i R N A M i c r o R N A 微 R N A P C R P o l y m e r a s e C h a i n R e a c t i o n 多聚酶链反应 T 7 R N A P T 7 R N A p o l y m e r a s e T 7 R N A 聚合酶 L D L R A P 1 l ow - de ns i t y l i popr ot e i n r e c e pt or a da pt e r 低 密 度 脂 蛋 白 受 体 适 配 器 pr ot e i n 1 蛋白质 1 R I S C R N A i nduc e d s i l e nc i ng c om pl e x R N A 沉默复合体 T E M E D t e t r a m e t hy l e t hy l e ne di a m i ne 四甲基乙二胺 E D T A e t hy l e ne di a m i ne t e t r a a c e t i c a c i d 乙二胺四乙酸二钠 di s odi um E B E t hi di um B r om i de 溴化乙锭 P A G E pol y a c r y l a m i de g e l e l e c t r ophor e s i s 聚丙烯酰胺凝胶电泳 E S C C E S c e l l s pe c i f i c c e l l c y c l e r e gul a t i ng 控制干细胞独特细胞周期 E S E m br y o ni c s t e m c e l l 胚胎干细胞 S E L E X S y s t e m a t i c E vol ut i on of L i ga nds by 指 数 富 集 的 配 基 系 统 进 化 E xpone nt i a l E nr i c hm e nt 技术摘 要 食品功能 m i c r o R N A 富集与制备研究 摘 要 m i c r oR N A m i R N A 是 一 类 长 度 在 19- 25 个 碱 基 长 的 , 单 链 非 编 码 R N A ; 其 特点是进化上保守 , 存在形式多样, 在基因中的位置也保守 ; 其担负着 1/ 3 以上 的 基 因 表 达 调 控 功 能 。 有 研 究 表 明 , 在 哺 乳 动 物 血 浆 中 发 现 了 多 种 成 熟 的 m i R N A , 这些 m i R N A 分子在分离提取后比一些大分子量 R N A 稳定的多 。 然而, 人们一直认为摄食的核酸成分 , 在消化到分解为单核苷酸 , 甚至分解为碱基后被 小肠吸收 , 对于 m i R N A 的稳定性,和功能性质值得研究。因此, 从食品科学的 角度出发 , 系统的研究摄食 m i R N A 对机体的作用和健康的影响很重要 。 我们的 目 的 是 获 取 大 量 可 食 用 的 m i R N A 原 料 。 如 果 能 收 集 到 自 然 界 稳 定 存 在 的 m i R N A ,对 在食品领域 研究 m i R N A 的功能性质有很大的理论和实际意义。 本 论 文 研 究 的 目 的 包 括 以 下 三 方 面 的 内 容 : 1 从 鱼 糜 生 产 废 料 中 提 取 m i R N A , 通过醇沉浓缩 , 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 提取的 m i R N A 分子及其含量 。 2 设计凝胶膜 液态电泳装置 以富集 m i R N A , 以 F I T C 荧光标记的 s s D N A 分子作 为指示样品 , 摸索富集装置稳定工作的条件 。 3 建立通用 R N A 转录系统, 用生 物酶法大量制备目的 m i R N A 。 用 低 毒 性 的 R N A 提 取 液 内 含 多 种 阴 离 子 表 面 活 性 剂 , 水 浴 100 ℃ , 提 取 15- 20 m i n 得到的 R N A ,相比普通 R N A 提取方法得到的大 片段 R N A 含量低 , 提 取的小分子 R N A 的比例高。 在食品加工废液体系中小 R N A 比大分子 R N A 稳定 的多。我们期望找到有效的方法对小 R N A 进行富集。 本文设计了特殊的凝胶膜电泳富集 m i R