酶工程第五章.pptVIP

第六节 物理修饰 通过各种物理方法，使酶分子的空间构象发生某些改变，而改变酶的某些特性和功能的方法称为物理修饰。 物理修饰的特点在于不改变酶的组分和基因，酶分子中的共价键不发生改变，只是在物理方法的作用下，副键发生某些变化和重排。例如：羧肽酶γ经高压处理后，底物特异性发生改变，有利于催化肽的合成反应，而水解反应的能力降低；用高压方法处理纤维素酶以后，该酶的最适温度有所降低，在30～40℃的条件下，高压修饰酶比天然酶的活力提高10％。 第六节 物理修饰 酶分子空间构象的改变还可在某些变性剂的作用下，先使酶原有空间构象破坏，然后在不同的条件下，使酶分子重新构建新的构象。例如：先用盐酸胍等变性剂使胰蛋白酶的原有构象破坏，通过透析除去变性剂后，在不同温度下，使酶重新折叠形成新的构象。结果表明，50℃条件下重新构建构象的胰蛋白酶的稳定性比在20℃下重建构象的酶提高5倍。天然胰蛋白酶的稳定性与20℃条件下重建构象的酶的稳定性基本相同。 酶工程 第五章 酶分子修饰 第—节 金属离子置换修饰 通过改变酶分于中所含的金属离子，使酶的特性和功能发生改变的方法称为金属离子置换修饰。简称为离子置换法。 有些酶含有金属离子。而且金属离子往往是酶活性中心的组成部分，对酶的催化功能起重要作用。例如：α-淀粉酶的 ，谷氨酸脱氢酶的 ，过氧化氢酶中的 等等。 若从酶分子结构中除去其所含的金属离子，酶往往会失活，若重新加入原有的金属离子，酶可以恢复原有活性，若加进不同的金属离子，则可使酶呈现不同的特性。有的可使酶活性降低，甚至失活；有的却可使酶的活力提高并增加酶的稳定性。 第—节 金属离子置换修饰 用于酶分子修饰的金属离子，往往是二价金属离子。例如 等等。金属离子置换修饰法只适用于本来在结构中含有金属离子的酶。 在离子置换修饰的过程中，首先要加入一定量的乙二胺四乙酸(EDTA)等金属螯合物到酶液中，使酶分子中的金属离子与EDTA形成螯合物，此时酶成为无活性状态。通过透析或超滤、分于筛层析等方法，可将EDTA-金属螯合物从酶液中分离除去。然后用不同的金属离子加到酶液中，酶蛋白与金属离子结合。根据离子种类的不同，经离子置换后的酶将会出现不同的特性。有些修饰酶活性比原来酶的活性降低，甚至完全无活性；有些修饰酶的活性比原酶活性提高；有些修饰酶的稳定性比原酶增加等。所以只要选择到适宜的金属离子作修饰剂，去置换原来的金属离子，就有可能提高酶活力，增加酶稳定性。 第二节 大分子结合修饰 利用水溶性大分子与酶结合，使酶的空间结构发生某些精细的改变，从而改变酶的特性与功能的方法称为大分子结合修饰法。简称为大分子结合法。 通常使用的水溶性大分子修饰剂有：有旋糖酐、聚乙二醇、肝素、蔗糖聚合物(Ficoll)、聚氨基酸等。这些大分子在使用前一般需经过活化，然后在一定条件下与酶分子以共价键结合。对酶分子进行修饰。例如：右旋糖酐先经高碘酸(HIO4)活化，然后与酶分于的氨基共价结合。 第二节 大分子结合修饰 第二节 大分子结合修饰 由于酶的结构各不相同，所以不同的酶所结合的修饰剂的种类和数量也有所差别，修饰后酶的特性和功能的改变情况也不一样。必须通过试验确定最佳的修饰剂的种类和浓度。操作时需根据所要求的分子比例控制好酶和修饰剂的浓度，并控制好温度、pH值和反应时间等修饰条件，以便获得理想的修饰效果。 大分子结合修饰品是目前应用最广的酶分子修饰方法。经过此法修饰的酶可显著提高酶活力，增加稳定性或降低抗原性。 第二节 大分子结合修饰 一、通过修饰提高酶活力 酶的催化能力受诸多因素的影响。本质上是由其特定的空间结构，特别是由其活性中心的特定构象所决定的。 水溶性大分子通过共价键与酶分子结合后，可使酶的空间结构发生某些改变，使酶的活性中心更有利于和底物结合，并形成准确的催化部位，从而使酶活力得以提高。例如：每分子核糖核酸酶与6.5分子的右旋糖酐结合，可使该酶的活力提高到原有的活力的2.25倍；用右旋糖酐修饰胰凝乳蛋白酶，当每分子酶与11分子右旋糖酐结合时，修饰酶的活力达到原有的活力的5.1倍；每分子胰蛋白酶用11分子的右旋糖肝修饰后，酶活力可提高30％等。 第二节 大分子结合修饰 二、通过修饰增加酶的稳定性 各种酶在保存或使用一段时间以后，由于受到各种因素的影响，原来完整的