氧化低密度脂蛋白诱导巨噬细胞内质网应激及CD36的可能作用.pdfVIP

生理学报 Acta Physiologica Sinica, October 25, 2010, 62 (5): 433-440 433 研究论文 氧化低密度脂蛋白诱导巨噬细胞内质网应激及CD36 的可能作用 1,2 1,2 1 2 1 1 1, 2 1,2,* 姚树桐 ，桑慧 ，杨娜娜 ，康莉 ，田华 ，张颖 ，宋国华 ，秦树存 1 2 泰山医学院 动脉粥样硬化研究所； 基础医学部，泰安 271000 摘 要：本文旨在研究在鼠源巨噬细胞泡沫化过程中氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein, ox-LDL)对巨噬细胞 内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS) 的诱导作用及其机制。体外培养RAW264.7 巨噬细胞，分别给予ox-LDL (25 、 50 和100 mg/L)、抗CD36 抗体+ox-LDL 和衣霉素(tunicamycin, TM)等不同处理。采用油红O 染色观察细胞内脂质蓄积情 况，酶比色法测定细胞内总胆固醇含量，免疫细胞化学法检测ERS 标志分子糖调节蛋白94 (glucose-regulated protein 94, GRP94)表达，免疫印迹法检测GRP94 及未折叠蛋白反应关键分子p-IRE1 (phosphorylated inositol-requiring enzyme 1)和X 盒结合蛋白1 (X box binding protein 1, XBP1)蛋白表达水平。结果显示，不同浓度(25 、50 和100 mg/L) ox-LDL 处理细胞24 h 后，胞浆内可见大量油红O 染色阳性脂质颗粒，细胞内总胆固醇含量明显增加，分别为空白对照组的2.1 倍、2.8 倍和3.1 倍；使用抗CD36 抗体阻断ox-LDL 的摄入，可显著减少100 mg/L ox-LDL 所致的细胞内胆固醇蓄积。不同浓度ox-LDL 和 ERS 诱导剂TM 均可显著增加GRP94 及其上游信号分子p-IRE1 和XBP1 蛋白表达，且表达强度随着ox-LDL 诱导浓度的增加 而增强；抗CD36 抗体显著抑制100 mg/L ox-LDL 所致的上述3 种蛋白表达上调。上述结果提示，ox-LDL 可呈剂量依赖性诱导 RAW264.7 巨噬细胞产生ERS ，激活未折叠蛋白反应信号通路；该过程可能由清道夫受体CD36 所介导。 关键词： 内质网应激；巨噬细胞；氧化低密度脂蛋白；C D 3 6 ；动脉粥样硬化 中图分类号：R332; R363.2; R329.2 Oxidized low density lipoprotein induces macrophage endoplasmic reticulum stress via CD36 1,2 1,2 1 1 1 1 1,2 YAO Shu-Tong , SANG Hui , YANG Na-Na , KANG Li , TIAN Hua , ZHANG Ying , SONG Guo-Hua , Qin Shu-Cun1,2,* 1Institute of Atherosclerosis; 2Institute of Preclinical Medicine, Taishan Medical College, Taian 271000, China Abstract: The purpose of the present study is to explore the effect of oxidized low density lipoprotein (ox-LDL) on the induction of endoplasmic reticulum stress (ERS) and the underlying mechanisms in ox-LDL-induced macrophage foam-formin