实验一--普通光学显微镜的使用及细菌的简单染色和革兰氏染色.pptVIP

实验室规章制度及实验基本要求 1.遵守实验室规则，爱护实验仪器设备。 2.实验前要写预习报告，了解目的、原理和基本方法，做到心中有数、思路清晰。 3.进入实验室要签名，指导老师检查预习报告。 4.实验操作要细心谨慎，严格遵守操作规则，认真进行观察，做好实验记录。 5.以实事求是的态度认真完成实验报告，并交给指导教师批阅。 6.随时注意实验台面的清洁，做完实验要清理好实验台面，卫生值日生要做好当日的清洁卫生。 7. 指导老师检查实验记录和实验任务，检查通过签字后方可离开实验室，走时注意关闭灯、电、火、窗。 实验考核 1. 微生物学实验成绩包括实验过程表现成绩、实验报告成绩 2. 实验过程表现成绩包括：实验操作是否正确规范、学习态度是否认真、实验结果如何是否符合逻辑、清扫值日等方面。成绩分为 ：良好、一般、差三级，相当于百分制 85、75、55。 3. 实验报告成绩包括：实验报告的格式是否正确、原理是否论述清楚，实验结果分析讨论是否正确，报告字迹是否清楚等方面，实验报告给定成绩分为：A+、 A、 A-、 B+、B、B-、C+、C、C- 九级，相当于百份制的 95、90、85、80、75、70、65、60、55。 微生物实验进程表 实验一 普通光学显微镜的使用及细菌染色 实验二 实验室环境、人体表面微生物检查及常用器皿包扎 实验三 细菌的芽孢和荚膜染色及观察 实验四 培养基的制备、分装与灭菌 实验五 放线菌、霉菌形态观察 实验六 微生物分离纯化技术 实验七 酵母菌形态观察及死活细胞鉴别和显微镜直接计数 实验八 平板菌落计数与接种 实验九 土壤微生物分离纯化 实验十 环境因素对微生物生长的影响 实验十一 微生物生理生化实验 实验十二 水中细菌总数和总大肠菌群的测定 * * * 实验方法 步骤 　　革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是： 　　1）涂片固定。 　　2）草酸铵结晶紫染1分钟。 　　3）自来水冲洗。 　　4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。 　　5）水洗，用吸水纸吸去水分。 　　6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。 　　7）蕃红染色液（稀）染2分钟后，自来水冲洗。干燥，镜检。原理 　　通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。 　　染色的差异主要是由于阴性与阳性细菌细胞壁的差异所应起的。 　　①革兰氏阳性细菌的细胞壁 　　G+细菌细胞壁具有较厚（20-80nm）而致密的肽聚糖层，多达20层，占细胞壁成分的60%～90%，它同细胞膜的外层紧密相连（图2-9）。有的G+细菌细胞壁中含有磷壁酸（teichoic-acid），也称胞壁质（murein），它是甘油和核糖醇的聚合物，磷壁酸通常以糖或氨基酸的酯而存在。由于磷壁酸带负电荷，它在细胞表面能调节阳离子浓度。磷壁酸与细胞生长有关，细胞生长中有自溶素（autolysins）酶类起作用，磷壁酸对自溶素有调节功能，阻止胞壁过度降解和壁溶。 　　如果细胞壁的肽聚糖层被消溶，G+细胞成为原生质体（protoplasts），细胞壁不复存在，而只存留细胞膜。除链球菌外，大多数G+细菌细胞壁中含极少蛋白质。 　　②革兰氏阴性细菌的细胞壁 G—细菌细胞壁比G+细菌细胞壁薄（15～20nm）而结构较复杂，分外膜（outer membrane）和肽聚糖层（2～3nm）（图2-10）。在细胞壁和细胞质膜之间有一个明显的空间，称为壁膜间隙（periplasmic space）。 　　外膜 G—细菌细胞壁外膜的基本成分是脂多糖（lipopolysaccharide,LPS），它同细胞质膜相同之处也是双层类脂，但除磷脂外还含有多糖和蛋白质。 　　LPS的多糖部分包括核心多糖和O-特异多糖。O-特异多糖由重复分支的碳水化合物分子组成，含有已糖（葡萄糖、半乳糖和鼠李糖）和二脱氧已糖。由于糖的种类不同，使各种G—细胞具有不同特性的LPS。核心多糖（core polysaccharide）的主要组分是酮脱氧辛酸（ketodeoxyoctonate, KDO）。 　　外膜中还含有几种蛋白，如脂蛋白、通透蛋白。有些蛋白具有通孔作用（porin），调控外界分子进入细胞；有的蛋白分子可以作为噬菌体的