入境环保微生物菌剂检测方法 第7部分：沙门氏菌 意见稿.docVIP

ICS点击此处添加ICS号 点击此处添加中国标准文献分类号 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T XXXXX—XXXX 进境环保微生物菌剂检测方法 第7部分：沙门氏菌 Methods for examination of import microbe agentia for environment protection Part 7: Salmonella 点击此处添加与国际标准一致性程度的标识 XXXX - XX - XX发布 XXXX - XX - XX实施 中 华 人 民 共 和 国 国家质量监督检验检疫总局发布 前言 本标准参考了《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》GB 4789.4-2010中“分离、生化试验、血清学鉴定”，和“食品中多种致病菌快速检测方法》PCR法》SN/T1869-2007中“PCR扩增”、《食品中致病菌检测方法 实时PCR法》SN/T1870-2007中“实时PCR检测”。 本标准按照GB/T1.1—2009起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、中华人民共和国天津出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：王金玲、栾慎顺、刘瑜、钟钰、王芳。 进境环保微生物菌剂检测方法 第7部分：沙门氏菌 范围 本标准规定了PCR、实时荧光PCR。 本标准适用于。下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 4789.28 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。对进行形态学生理生化、PCR扩增或实时荧光PCR扩增等试验，判定样品中是否含有沙门氏菌。 取样人员在对微生物菌剂的取样过程中，参照我国病原微生物实验室生物安全管理条例，做好个人防护。为了保护实验室人员的安全，应由具备资格的工作人员进行检测，所有培养物应小心处置。并参见GB19489中的有关规定执行。 实验用水（应符合GB/T6682中一级水的规格）。 生理盐水：见附录A中A.1章。 四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液：见附录A中A.2章。 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液：见附录A中A.3章。 亚硫酸铋（BS）琼脂：见附录A中A.4章。 木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂：见附录A中A.5章。 沙门氏菌属显色培养基。 三糖铁（TSI）琼脂：见附录A中A.6章。 蛋白胨水、靛基质试剂：见附录A中A.7章。 尿素琼脂（PH 7.2）：见附录A中A.8章。 氰化钾（KCN）培养基：见附录A中A.9章。 赖氨酸脱羧酶试验培养基：见附录A中A.10章。 邻硝基酚β-D半乳糖苷（ONPG）培养基：见附录A中A.11章。 半固体琼脂：见附录A中A.12章。 丙二酸钠培养基：见附录A中A.13章。 沙门氏菌O和H诊断血清。 生化鉴定试剂盒。 TE缓冲液（pH值8.0）：见附录A中A.14章。 溶菌酶（10 mg/mL）: 见附录A中A.15章。 蛋白酶K（20 mg/mL）：见附录A中A.16章。 10 %SDS：见附录A中A.17章。 3 mol/L乙酸钠：见附录A中A.18章。 dNTP: dATP、 dTTP、 dGTP 、dCTP。 TBE：见附录A中A.19章。 Taq DNA 聚合酶。 细菌基因组DNA提取试剂盒。 琼脂糖。 溴化乙锭。 DNA分子量标记：100 bp DNA ladder。 电子天平（感量0.01 g）。 拍击式均质器 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃、42 ℃±1 ℃ 恒温水浴锅。 台式冷冻离心机（最高转速15000 r/min）。 PCR扩增仪。 实时荧光PCR仪。 微量移液器和灭菌吸头：10 μL、20 μL、200 μL、1000μL。 高压灭菌锅。 PCR超净工作台。 电泳仪。 核酸/蛋白分析仪。 凝胶成像系统。 无菌培养皿：直径90 mm。 样品制备：以无菌操作取1 g（mL）样品加入到100 mL生理盐水中混匀，从中移取25 mL至盛有225 mL 灭菌生理盐水的无菌均质袋内，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。取样过程中，在样品旁边放置1个营养琼脂平板作为空白对照。 将上述样品匀液吸取1 mL，接种于10 mL TTB内，于42 ±1 ℃培养18～24 h。同时，另取1 mL，接种于10 mL SC内，于36±1 ℃培养18～24 h。 无菌条件下，用接种环分别取7.2增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板于36 ℃+1 ℃培养40 h~48 h，和一个XLD琼脂平板（或沙门氏菌显色培养基）于36 ℃+1 ℃分别18 h