实验七温度、pH、激活剂与抑制剂对酶促作用影响.docVIP

实验六　温度、pH、激活剂与抑制剂对酶促作用的影响 【目　的】 通过本实验，观察影响酶促作用的一些因素。 【原　理】 唾液淀粉酶可催化淀粉逐步水解，生成分子大小不同的糊精及最后水解成麦芽糖。淀粉及糊精遇碘各呈不同的颜色反应。直链淀粉(即可溶性淀粉)遇碘呈蓝色，糊精按分子的大小遇碘可呈蓝色、紫色，睛褐色和红色。最小的糊精和麦芽糖遇碘不显色。根据颜色反应，可以了解淀粉被水解的程度。由于在不同温度、不同酸碱度下，唾液淀粉酶的活性高低不同，所以淀粉被水解的程度也不一样。另外，有些物质可作为激活剂，能提高酶活性，有些物质可作为抑制剂，能降低酶活性，也能影响淀粉被水解的程度。因此、通过与碘产生的颜色反应判断淀粉被水解的程度，了解温度、pH，激活剂和抑制 剂对酶促作用的影响。 【试　剂】 1、1％淀粉溶液配制 取可溶性淀粉1克，加5毫升蒸馏水，调成糊状，再加蒸馏水80毫升，加热，使其溶解，最后用蒸馏水稀释至100毫升。 2、稀释唾液制备 将痰咳尽，用水漱口，再含蒸馏水30毫升，作咀嚼运动，2分钟后吐入烧杯中，再用滤纸过滤后待用。 3、不同PH缓冲液 （1）PH6.8缓冲液　用0.2M磷酸二氢钠溶液772毫升，0.1M柠檬酸溶液485亳升，混合即得。 （2）pH5.0缓冲液　取0.2M磷酸氢二钠溶液515毫升，0.1M柠檬酸溶液485毫升，混合即成。 （3）pH8.0缓冲液　取0.2M磷酸氢二钠溶液972毫升，0.1M柠檬酸溶液28毫升，混合即成。 4、0.9％NaCl溶液。 5、0.1％CuSO4溶液。 6、0.1％Na2SO4溶液。 【器　材】 10×100毫米试管、恒温水浴、沸水浴、水浴、蜡笔。 【操　作】 一、温度对酶促作用的影响 1、取试管三支，用蜡笔编号，每管各加入pH6.8缓冲液20滴，1％淀粉10滴。 2、将第一管放入37℃恒温水浴，将第二管放入沸水浴，将第三管放入冰浴。 3、放置5分钟后，分别向各管加入稀唾液5滴，再放回原处。 4、10分钟后，分别向各管滴加碘液1滴，观察三管中颜色的区别，说明温度对酶促作用的影响。 二、pH对酶促作用的影响 试剂 试管 pH5.0缓冲液 pH6.8缓冲液 pH8.0缓冲液 淀粉溶液1％ 稀唾液 1 20滴 — — 10滴 5滴 2 — 20滴 — 10滴 5滴 3 — — 20滴 10滴 5滴 2、将上面三管放放37℃恒温水浴中保温。 3、5～10分钟后，取出各管，分别加入1滴碘液，观察三管颜色区别，说明pH对酶促作用的影响。 三、激活剂与抑制剂对酶促用作的影响 1、取试管四支，编号后按下表加入各种试剂。 试剂 试管 缓冲溶液 PH6.8 1% 淀粉溶液 蒸馏水 0.9% NaCl溶液 0.1% CuSO4溶液 0.1% Na2SO4溶液 稀唾液 1 20滴 10滴 10滴 — — — 5滴 2 20滴 10滴 — 10滴 — — 5滴 3 20滴 10滴 — — 10滴 — 5滴 4 20滴 10滴 — — — 10滴 5滴 2、将上列各管放入37℃恒温水浴中保温。 3、5～10分钟后，取出各管，各加入碘液1滴，观察各管颜色的区别，说明激活剂与抑制剂对酶促作用的影响。