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实验六 肠道杆菌 示教： 主要肠道杆菌（大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌及变形杆菌）的形态、染色性 主要肠道杆菌（大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌及变形杆菌）的培养特性 主要肠道杆菌（大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌及变形杆菌）的生化反应 操作： 肥达反应 粪便肠道致病菌的分离和鉴定 SS平板－分离肠道病原菌的强选择培养基 成分和作用： 基础培养基：提供氮源和碳源 胆盐、枸橼酸钠、煌绿：可抑制肠道非致病菌的生长，而对肠道致病菌抑制作用弱。 乳糖，中性红（pH6.8-8.0，红→橙黄） ：致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质→菌落淡黄色；大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈红色 病原菌:小,无色,半透明 非致病菌:大,红色 克氏双糖培养基 接种方法 如何观察 上层含乳糖部分 乳糖发酵：致病菌红色，非致病菌黄色 H2S 然后观察下层 发酵葡萄糖（产酸产气） 动力 * 肥达试验(Widal Test) 原理：用已知伤寒沙门菌O、H抗原，以及甲型副伤寒、肖氏沙门菌、希氏沙门菌H抗原的诊断菌液与受检血清作定量凝集试验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价的试验。 用途：辅助诊断伤寒，副伤寒 生理盐水 1:1280 1:640 1:320 1:160 1:80 1:40 1:20 0.2ml 0.2ml 副乙H 0.2ml 0.2ml 副甲H 0.2ml 0.2ml 伤寒H 0.2ml 0.2ml 伤寒O 8 7 6 5 4 3 2 1 微量板 Ag 测 Ab 已知 未知 滴度 病人1：10血清 血清1：20 0.2ml×4 第一列小孔 0.8 ml 吸管吹打3次 1.6ml 生理盐水0.8 ml 混匀 0.8ml 混匀 1：40 0.2ml×4 第二列小孔 生理盐水0.8 ml 0.8ml 混匀 …… 生理盐水0.8 ml 1：80 …… Ag加样方向 1.稀释Ab 2.加Ag 3.45℃孵育30’ 4.结果观察 粪便标本肠道致病菌分离鉴别流程 标本 选择鉴别培养基 SS平板 生化反应 血清学鉴定 双糖管等 已知Ab检测未知Ag (玻片凝集试验) SS 平板挑取可疑菌落2个 (无色,透明,小) 接种双糖管 培养,观察 37℃ 24h ？和球菌的不同 病原菌:透明,无色 非致病菌:紫黑色 EMB（Eosin Methyl Blue)平板－分离肠道病原菌的弱选择培养基 乳糖 硫酸亚铁 固体 葡萄糖 半固体 指示剂:酚红 *