进出口化妆品中施氏家单胞菌的检测方法.docVIP

前 言 本依据GB/T 1.1-2009要求起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任本由国家认证认可监督管理委员会提出。 本由全国进出口食品检测标准化技术委员会（SAC/TC445）归口。 本本本标准适用于各类化妆品中施氏假单胞菌的检测（卫生部）GB/T 6682　分析实验室用水和试验方法 SN/T 1538.1培养基制备指南 第1部分：实验室培养基制备质量保证通则SN/T 1538.2　培养基制备指南 第2部分：培养基性能测试实用指南（ISO/TS 11133-2:2003，MOD）天平：感量0.1g。 高压灭菌器。 ，带盖。试管：带盖。无菌吸管或移液器和配套吸头：1 mL、5 mL及10 mL。 无菌器具：镊子、剪刀、小刀及药勺。 培养皿：已灭菌，直径90 mm～100 mm。 恒温培养箱：35±2℃。 API 20NE鉴定试剂盒1）或其它微生物鉴定试剂盒 GB/T 6682中一级水的要求。为保证培养基的质量，宜按照SN/T 1538.1和SN/T 1538.2 对培养基进行质量控制，也可使用符合SN/T 1538质量要求的商品化培养基。见附录A.1章 灭菌吐温80。 大豆酪蛋白葡萄糖卵磷脂吐温80培养基 假单胞菌CFC琼脂：见附录A.3章。 胰蛋白胨大豆琼脂（TSA：见附录A.章。 淀粉琼脂 检验程序 化妆品中施氏假单胞菌的检验程序见图1。 图1 施氏假单胞菌的检测程序 样品制备 化妆品中不同类型的检样参照《化妆品卫生规范》（卫生部）1:10的样品匀液。 检验步骤 增菌 取110样品稀释液10 mL 接种到90 mL SCDLP液体培养基中，置35±2℃培养h～4h。 自上述培养液中，取1～2接种环，划线接种于琼脂平板中，置35±2℃培养18 h～24 h。在琼脂平板菌落呈从平板上挑取3～5个可疑菌落接种到TSA35℃±2℃培养24 h，进行氧化酶试验可疑菌落TSI试验 将可疑菌落纯培养物接种于TSI，置于35±2℃培养18 h～24 h，鉴定麦芽糖将纯培养物接种至氏麦芽糖OF，35±2℃培养麦芽糖将纯培养物接种至，35±2℃培养施氏假单胞菌将纯培养物接种至35℃±2℃培养18 h～24 h将纯培养物接种至35℃±2℃培养18 h～24 h35℃±2℃培养18 h～24 h35℃±2℃培养18 h～24 h°C～°C放置10 min～35℃±2℃培养18 h～24 h35℃±2℃培养18 h～24 h°C生长试验 将纯培养物划线接种TSA琼°C±1°C培养 h～48 h42°C不生长。 淀粉水解试验 将纯培养物划线接种至淀粉琼脂，35℃±2℃培养18 h～24 h然后将碘试剂直接滴浸于培养表面，立即检视结果，阳性反应（淀粉被分解）为琼脂培养基呈深蓝色、菌落或培养物周围出现无色透明环阴性反应则无透明环或肉汤呈深蓝色。 ＋ ＋ 金氏麦芽糖OF试验 － ＋ 乙酰胺 ＋ － － － 葡萄糖酸盐 ＋ － － － 硝酸盐还原产气 ＋ － － ＋ 明胶液化 ＋ － － － 精氨酸双水解酶 ＋ ＋ ＋ － 赖氨酸脱羧酶 － ＋ － － 42°C生长 ＋ － － － 淀粉 － － ＋ 注：＋表示阳性；－表示阴性。 结果报告 经鉴定符合表1中生化特性，或API 20NE生化鉴定为施氏假单胞菌，报告样品中是否检出施氏假单胞菌。 （规范性附录）培养基和试剂 8.5 g 蒸馏水 1 000 mL 90mL，121℃高压灭菌20 min。 大豆酪蛋白葡萄糖卵磷脂吐温80培养基酪蛋白胨 17.0 g 大豆蛋白胨 3.0 g 氯化钠 5.0 g 磷酸氢二钾 2.5 g 葡萄糖 2.5 g 卵磷脂 1.0 g 土温80 7.0 g 蒸馏水 1 000 mL 将上述成分混合后，加热溶解。调PH为7.2~7.3分装，121℃高压灭菌20 min。注意震荡，使沉淀于底层的吐温80充分混合，待冷却至25℃左右使用。 消化酶明胶蛋白胨 16.0 g 消化酶酪蛋白胨 10.0 g 硫酸钾 (K2SO4) 10.0 g 氯化镁 （MgCl2） 1.4 g 琼脂a 12.0 g～18.0 g 水 1 000 mL a：用量取决于琼脂的凝胶强度 用水溶解各成分或脱水合成培养基，煮沸。必要时调整pH值，使灭菌后的培养基在25℃时pH值为7.2±0.2。将培养基分装到容量合适的三角烧瓶或瓶中。放入高压灭菌器中，121℃高压灭菌15 min。 基础培养基 0.1%头孢菌素溶液 0.1%夫西地酸钠Sodium fusidate）溶液 0.1%溴化十六烷基三甲铵溶液 制备 将基础培养基在水浴中冷却至47℃±2℃，加入抑制剂溶液，混匀。