进出口化妆品中嗜麦芽黄单孢菌的检测方法.docVIP

ICS SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN XXXX—XXXX 进出口化妆品中嗜麦芽窄食单胞菌的检测 Determination of Stenotrophomonas maltophilia in cosmetics for import and export （送审稿） XXXX-XX-XX发布 XXXX-XX-XX实施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发 布 前言 本标准依据GB/T 1.11部分：标准的结构和编写规则》的要求进行编制进出口化妆品中嗜麦芽窄食单胞菌的检测 范围 本标准规定了。 本标准适用于下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 , 散布于人体表面任何部位（皮肤、毛发、指甲、口唇等）, 以达到清洁、消除不良气味、护肤、美容和修饰目的的日用化学工业产品。 嗜麦芽窄食单胞菌 Stenotrophomonas maltophilia 嗜麦芽窄食单胞菌是一种革兰氏阴性杆菌，在自然界中分布甚广，广泛存在于各种水源、牛奶、冰冻食品、土壤、植物根系、动物及人体等，是一种条件致病菌。主要寄生在呼吸道，引起呼吸道感染，还可引起心内膜炎、败血症、肺炎、脑膜炎、尿路感染等。其典型生化特征为：非发酵型细菌，不产气，氧化酶阴性，DNA酶阳性，有动力，水解七叶苷，能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐。另外，嗜麦芽窄食单胞菌对亚胺培南具有天然耐药性。 材料和设备 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 恒温培养箱：30 ℃±1 ℃. 冰箱：2 ℃～5 ℃。 天平：感量0.1 g。 均质器。 振荡器。 玻璃珠。 灭菌研钵。 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）或微量移液器及吸头。 无菌锥形瓶：容量500 mL。 无菌培养皿。 pH计或pH比色管或精密pH试纸。 全自动微生物鉴定系统或类似设备。 培养基和试剂 灭菌生理盐水：见附录A中A.1章。 SCDLP液体培养基：见附录A中A.2章。 血琼脂平板：见附录A中A.3章。 中国蓝琼脂：见附录A中A.4章。 MH琼脂：见附录A中A.5章。 革兰氏染液：见附录A中A.6章。 克氏双糖铁琼脂：见附录A中A.7章。 氧化酶试剂：见附录A中A.8章。 SIM动力培养基：见附录A中A.9章。 DNA酶琼脂：见附录A中A.10章。 明胶培养基：见附录A中A.11章。 硝酸盐培养基：见附录A中A.12章。 1 mol/L盐酸：见附录A中A.13章。 1 mol/L氢氧化钠：见附录A中A.14章。 七叶苷培养基：见附录A中A.15章。 亚胺培南药敏片。 灭菌液体石蜡。 灭菌吐温80。 生化鉴定试剂条或其他等效产品。 检验程序 嗜麦芽窄食单胞菌检验程序见图1。 图1 嗜麦芽窄食单胞菌检验程序 样品制备 化妆品中不同类型的检样制备参照GB/T 7918.1进行制样。 操作步骤 增菌培养 取1：10样品稀释液10 mL加到90 mL SCDLP液体培养基中，置℃±1 ℃，培养48±2 h。取增菌液一环，分别划线接种血平板、中国蓝平板，置30 ℃±1 ℃，培养48 h±2 h。嗜麦芽窄食单胞菌在血平板、中国蓝平板上生长迅速，血平板上菌落呈灰绿色或淡黄色，直径1-2 mm，圆形光滑凸起，湿润，边缘整齐，有氨气味。中国蓝平板上菌落呈乳白色，略显淡红色，直径2-3 mm，圆形光滑湿润，不透明。 自选择性琼脂平板上挑取典型或可疑菌落，划线接种于MH平板，℃±1 ℃，培养48±2 h。 挑取MH平板上的可疑菌落，进行克氏双糖铁试验、氧化酶试验、动力试验、DNA酶试验、明胶液化试验硝酸盐还原试验。嗜麦芽窄食单孢菌的主要生化特征见表1。利用嗜麦芽窄食单菌对亚胺培南100%天然耐药，采用K-B纸片法，进行耐药性试验，依据这一特点对其进行鉴定。挑取嗜麦芽窄食单菌可疑菌落的纯培养物，接种到10 mL SCDLP液体培养基中，℃± 1 ℃，培养48±2 h后，涂布MH平板，将亚胺培南药敏片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长不被抑制，没有形成透明的抑菌圈，表明被检 嗜麦芽窄食单胞菌的生化特征 试验项目 结果 革兰氏染色镜检 阴性 克氏双糖铁 不发酵产酸，不产气 氧化酶 阴性 动力 阳性 DNA酶 阳性 明胶液化 阳性 硝酸盐还原 还原硝酸盐为亚硝酸盐 七叶苷水解 阳性 结果报告 综合以上生化特征和耐药性试验的结果，报告样品中检出或未检出嗜麦芽窄食单胞菌。（规范性附录）试剂和培养基 无菌生理盐水 成分 氯化钠 8.5 g 蒸馏水 1000 mL 称取