总糖的测定方法.docVIP

总糖的测定方法（斐林氏溶液快速测定法） 原理：酶制剂生产中需要测定发酵液中糖质原料的消耗情况，以便掌握发酵过程。葡糖糖、果糖、麦芽糖等为醛基、酮基或半缩醛基的糖都具有还原性，能使二价铜还原为一价铜，发酵液中的糊精、淀粉经过酸水解也能成为还原糖。可根据其还原性，用一定量的斐林氏溶液将葡萄糖完全氧化，过量的斐林氏溶液与碘化钾作用而析出碘，然后用硫代硫酸钠来滴定，查表求的发酵液中的糖含量。 试剂： 1、3N的盐酸溶液：浓硫酸一份加蒸馏水3份。 2、6N的氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠240.06克，溶解定容至1000毫升。 3、斐林氏溶液： A液：硫酸铜（五水硫酸铜）24克定容400毫升。 B液：酒石酸钾钠75克、氢氧化钠50克 定容400毫升。 C液：碘化钾60克，定容200毫升。 A液、B液、C液混合为1000毫升溶液。 注意：配制时应按顺序配制，分别充分溶解，然后混合（A+B+C)摇匀备用。 4、4N的硫酸溶液：准确吸取化学纯浓硫酸111毫升于1000毫升的容量瓶中，用蒸馏水 定容至刻度。 5、0.05N的硫代硫酸钠溶液：精确称取化学纯的硫代硫酸钠12.41克与碳酸钠0.1克，用 新沸初冷蒸馏水溶解定容1000毫升。（此溶液配置好后需隔一周才能使用，每月需标 定一次）。 6、1%的酚酞指示剂：称取酚酞1克，溶于95%的乙醇中，定容至100毫升。 操作方法： 样品：吸取0.5毫升样品（发酵滤液），放入100毫升的三角瓶中（做两只可对照），加入3N的盐酸10毫升加热3分钟，冷却后滴入酚酞指示剂2滴，用6N的氢氧化钠溶液调至红色，再加入斐林氏溶液10毫升，煮沸3分钟，冷却后加入4N的硫酸10毫升，用0.05N的硫代硫酸钠滴定至奶油色为终点（在接近终点时加1%的指示剂，使之呈紫色）。 空白：在100毫升的三角瓶中加蒸馏水10毫升，然后加入斐林氏溶液10毫升煮沸3分钟，冷却后加入4N的硫酸10毫升，用0.05N的硫代硫酸钠滴定至奶白色。 计算：空白消耗0.05N的硫代硫酸钠的毫升数减样品消耗的0.05N的硫代硫酸钠的毫升数，然后查表。 表： 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 0 0.03 0.06 0.10 0.13 0.16 0.19 0.22 0.26 0.29 1 0.32 0.33 0.38 0.42 0.45 0.48 0.51 0.54 0.58 0.61 2 0.64 0.67 0.71 0.72 0.77 0.81 0.84 0.87 0.9 0.93 3 0.97 1.00 1.04 1.07 1.10 1.14 1.17 1.20 1.23 1.26 4 1.30 1.34 1.37 1.40 1.44 1.47 1.50 1.54 1.57 1.41 5 1.64 1.68 1.71 1.75 1.78 1.82 1.85 1.89 1.92 1.96 6 1.99 2.03 2.06 2.10 2.13 2.17 2.20 2.24 2.27 2.31 7 2.34 2.38 2.41 2.43 2.48 2.51 2.56 2.59 2.63 2.66 8 2.70 2.74 2.77 2.81 2.86 2.89 2.92 2.96 3.00 3.03 9 3.07 3.11 3.15 3.18 3.22 3.26 3.30 3.34 3.37 3.41 10 3.44 3.48 3.52 3.55 3.59 3.63 3.67 3.71 3.74 3.78 11 3.82 3.86 3.90 3.94 3.98 4.02 4.03 4.09 4.13 4.17 12 4.21 4.25 4.29 4.33 4.37 4.41 4.45 4.49 4.53 4.57 13 4.61 4.65 4.69 4.73 4.77 4.82 4.86 4.90 4.94 4.98 14 5.04 5.06 5.10 5.14 5.18 5.25 5.27 5.31 5.35 5.40