鼠伤寒沙门氏菌适应突变研究.pdfVIP

摘要 摘 要 {长期‘以来，人们认为自然界存在的突变都是随机发生的，环境条件只对变 异起选择作用。但1988年，JohnCaims等发现的适应突变现象改变了我们关 于自发突变起源的观点。由于适应突变是一类新发现的自发突变，在进化上 可能起着极其重要的作用，而且己知体细胞突变和细菌适应突变都发生在细 胞的静止期或非常缓慢分裂的生长期，因此适应突变机理的阐明可能为揭示 癌症发生机理提供启示{ 本文以鼠伤寒沙叮氏菌缥吟生物合成途径中一个反式调节基因purR的 超阻遏突变体 ((purR`,purD-lac)为材料，该突变体因purR的超阻遏作用 而使与purD融合的lacZ基因表达受到高度阻遏，导致该突变体细胞在以乳 糖为唯一碳源补加限量腺嗦吟的NCE培养基上不能生长形成菌落，但反式调 节基因purR或结构基因purD的顺式调节元件PURbox发生突变均可解除 purR的超阻遏状态，使突变体细胞能在上述选择平板上生长。当把该突变 体涂布在上述选择平板延长培养时，我们观察到了 “Lac`”回复子的积累。 通过对迟后突变体的重建排除了此类突变体为缓慢生长突变体; Fluctuationtest实验证明迟后突变发生在乳糖选择平板上;共转导分析和 核昔酸序列测定证明迟后突变分别发生在purR和PURbox.以上结果表明， 本实验系统观察到的现象为purR和PURbox的适应突变。 为探讨适应突变是否产生于与随机突变同样的突变机制，本文对适应 突变和随机突变的靶序列一16byPURbox进行了突变谱分析。我们对从200 个独立培养物中获得的随机突变体和适应突变体进行了转导分析。为保证所 分析的突变体的独立性，每个对立培养物只选择一个随机突变体和一个适应 突变体进行转导分析。最后，从中确定了45个PURbox随机突变体和41个 适应突变体。随后我们对这些突变体进行了克隆和核普酸序列测定，并对它 们的突变谱做了比较分析，结果表明:二者在突变类型上存在差异:在分析 摘要 II 一户~~，，，，，，加一，，，， 的45个随机突变体中，绝大多数是产生于PURbox的碱基置换，但存在一 个缺失和一个重复:而分析的41个适应突变体中，均为PURbox的碱基置 换。这种突变类型的异质性可能是由于适应突变和随机突变的机制有所不 同，当然也可能是由于我们分析的适应突变体数不够 (41)，因此不能排除 在分析足够多的适应突变体数后出现缺失和重复的可能性，所以有必要对另 一适应突变的靶基因purR的随机突变体和适应突变体进行突变谱分析，来 验证这一推测。夕 本文首次将适应突变基因扩大到purR调节基因和嗦吟结构基因的顺式 元件PURbox，也是首次在乳糖选择条件下直接观察到两个遗传位点的适应 突变现象。这一新的实验系统还为研究适应突变机理提供了新的可能途径。 关键词:鼠伤寒沙门氏菌 purRs适应突变 ABSTRACT III ABSTRACT Formanyyearsitwasdogmathatallmutationoccurredinarandommanner andenvironmentalconditiononlyhaveaselectiveeffectonvariation.Till1988, JohnCairnsandhiscollaboratorspublishedanarticleentitledTheOriginof Mutantsthathaschangedourthinkingabouthowspontaneousmutationsarise. Asanewsortofspontaneousmutation,adaptivemutationmayplayanimportant roleonevolution.Andclarificationofmechanismofadaptivemutationmay provideaguidanceonrevealingthemechanismofcancerbecauseitha