圈卷色链霉菌尼可霉生物合成相关基因的研究.pdf

中文摘要 尼可霉素是几丁质合成酶的强竞争性抑制剂，对真菌、昆虫和瞒虫都有抑 制作用，而对动物、植物无毒害作用且在自然界中易被降解，是一种较为理想 的农用抗生素。 / 1 夯 圈卷产色链霉菌 (Streptomycesansochromogenes)7100是从我国东北土壤 中 离的尼可霉素产生菌。通过反向遗传学方法获得了一个与尼可霉素生物合 成相关的111-bpDNA片段，以该片段为探针，从圈卷产色链霉菌7100的部 分基因文库中克隆到一个2.2-kbDNA片段。序列测定和分析结果表明，2242- byDNA片段包含两个完整的开放阅读框，分别命名为:anF和，anGosanF由 657个核普酸组成，编码一个218个氨基酸残基的蛋白质。在蛋白数据库中未 找到与 SanF同源性高的己知功能的蛋白，说明sanF是一个新基因，该基因 已在Genbank中登陆，登陆号为AF223971。采用基因破坏的策略研究了sanF 的功能，结果表明sanF与圈卷产色链霉菌的尼可霉素生物合成密切相关，sanF 阻断突变株不能合成有生物活性的尼可霉素。 sanG由663-bp组成，位于:anF的上游，转录方向与sanF相反。它可能 编码一个220个氨基酸残基的蛋白质，在蛋白数据库中未找到与它同源性高的 己知功能的蛋白，说明sanG亦是一个新基因。sanG基因的阻断不影响圈卷产 色链霉菌合成有生物活性的尼可霉素。 sanH和sanI是*mG上游共转录的两个基因，它们分别由1233和 195个 核昔酸组成，各自编码410和64个氨基酸残基的蛋白质。蛋白数据库比较结 果表明，sanH和sanI与浅灰链霉菌 (Streptomycesgriseolus)中共转录的细胞 色素P450(cytochromeP450)和铁氧还蛋白(ferredoxin)有较高的同源性， 一致性为46%和56%，相似性为62%和70%。基因功能研究表明，虽然:anH 基因的破坏不影响圈卷产色链霉菌产生的尼可霉素的生物活性，但该基因可能 参与了尼可霉素的生物合成。 以与尼可霉素生物合成相关的1.9-kbKpnl片段为探针，从圈卷产色链霉 菌的Cosmid文库中克隆到一个约11-kbDNA片段。通过序列测定及分析表明， 该片段除含有完整的sanG,sanF,sanA,B,C,D和E外，还含有3个开放阅读 框 (ORFs)oORF1与ORF2,ORF3的转录方向相反，与、anFA,B,CD和E 的转录方向相同，可能sanF,A,B,C,D,E与ORF1组成了一个共转录单位。 在蛋白序列数据库中进行了同源性比较，ORF1编码蛋白与I}l}.}霉}if7`1Pv.al 霉素生物合成蛋白NikO有很高的同源性 (一致性为91%)，它们都与UDP-N- 乙酞葡萄糖胺 1-梭基乙酞转移酶类似。ORF2和ORF3编码蛋白分别与天蓝色 链霉菌S.coelicolorA32()的假设蛋白SCD6.30。和SCD6.31有·高同源，。卜 关键词:圈卷产色链霉菌 尼可霉素 基因克隆基因破坏 Abstract Nikkomycinisapotentcompetitiveinhibitorofchitinsynthetases.Itcan inhibitthechitinsynthetasesinfungi,insectsandacarids,anditisnon-toxicto mammals,plantsandbees,andeasytobedegradedinnature.Allthesefactorsmake nikkomycinapromisingandnon-pollutionalagriculturalantibiotics. Streptomycesansochromogenes7100isanikkomycinproducer,whichwas isolatedfromthesoilofNortheastChina.Withthemethodofreversegenetics,we obtaineda 111-bpDNA rfagmentrelatedtonikkomycinbiosynthesisof Streptomycesansochromogenes7100.Then,a2.2-kbDNAfragmentwascloned fromtheDNAlibrary