圈卷产色链霉菌形态分化和尼可霉素生物合成相关基因的结构与功能.pdf

摘 要 圈卷产色链霉菌是从我国东北土壤中分离到的一株尼可霉素产生菌。它与 天蓝色链霉菌的形态分化周期存在着明显的差异，两者菌丝的螺旋程度不同; 前者只形成半圈或一圈松散的螺旋，而后者则形成多圈紧密的螺旋。本论文工 作针对这一不同点，开展了圈卷产色链霉菌形态分化基因的研究工作。借先， 利用诱变等方法筛选到了圈卷产色链霉菌白色突变株一W19。显微镜下Cz，其 气生菌丝长而直，顶部略有波浪形卷曲，螺旋程度明显有所下降.推测W19中 发生突变的白基因可能与圈卷产色链霉菌分化过程中菌丝螺旋及抱子形成密切 相关。以W19为受体菌，通过互补克隆得到了圈卷产色链霉菌分化相关基因一 sawB.saWB编码一个由295个氨基酸组成的蛋白质，与天蓝色链霉菌转录调 控蛋白WhiH具有81%0勺同源性乡功能研究结果揭示，sa基‘因的破坏导致圈 卷产色链霉菌不能形成饱子，而呈白色表型。显微镜下观察发现，awB突变株 的形态与W19相同。由此可知，saWB是圈卷产色链霉菌形态分化中的一个重 要基因。此外，saWB可互补天蓝色链霉菌whiH突变株C119，使之恢复野生型 表型，产生紧密螺旋及丰富的灰色抱子。 序列分析结果揭示，在 saWB的下游存在另一个开放阅读框一hrd8.hrdB 基因编码产物与天蓝色链霉菌初级sigma因子一6nrd“具有76%的同源性;基因 阻断结果表明，hrdB基因是圈卷产色链霉菌生长所必需的，hrdB基因的阻断 导致菌株致死效应。因此，可以初步确定hrdB基因是圈卷产色链霉菌初级仃 因子。 圈卷产色链霉菌产生的尼可霉素在防止植物真菌病害及人类深部真菌感染 的治疗中具有重要的应用价值·冬论文的工作从圈卷产色链霉菌710“中先后 克隆到了两个DNA片段一7.5-kb的On工DNA片段和7.0-kb的Bank工DNA片 段。对这两个片段进行了部分序列分析，结果得到了89676p的核昔酸序列;利 用Frameplot2.3程序进行了序列分析，结果揭示在这段DNA序列中包含有6 摘 要 个完整的开放阅读框一sanJ,sanK sanL,sanM,sanN和 sanO.其中sanJ, sa武 sanL,sanY和 sanN的转录方向相同，而且，相邻的基因间有一定程度 的重叠，推测可能属于同一个转录单位;sanO的转录方向与这5个基因相反。 功能研究结果揭示，sanJ,sanK sanL,sanff和sanN是圈卷产色链霉菌尼可 霉素生物合成所必需的，这些基因的阻断使相应的突变株不能产生尼可霉素。 同源比较结果揭示，sanJ编码产物属于腺昔酸合成酶超家族;saflK编码产物 类似于肌氨酸单体氧化酶类;saflL编码一个赖氨酸一2-氨基转移酶，推测其催 化尼可霉素肤基合成的起始反应;sanm和 .sanN的编码产物分别类似于4-轻 基一2一氧代一戌酸醛缩酶和乙醛脱氢酶，推测这两个酶可能与芳香族碳氢化合物 的分解代谢有关。这五个基因可能参与尼克霉素肤基部分的生物合成 san0 与 sanJ毗邻，同源性比较结果揭示，san0编码产物与细菌多肚合成酶具有 较高的同源性;进一步的结构分析表明，在SanO分子中，含有三个ATP结合 位点，一个ATP酶结构域和一个硫酷酶结构域;因此推测，SanO可能是一个 多肤合成酶。利用基因阻断策略对san0的功能进行了研究，结果表明，san0是 圈卷产色链霉菌尼克霉素生物合成所必需的基因。本实验结果揭示，圈卷产色 链霉菌尼可霉素生物合成基因sanJ,sanA,,sanL,sandl,sanAl和san0是成簇 排列的; 上述研究结果为阐明圈卷产色链霉菌尼可霉素生物合成的分子机制奠定了 基础。飞 摘要:圈卷产色链霉菌形态分化尼可霉素旋们卉‘:厂 」七 jyr2台11甲 Abstract Streptomycesansochromogenes7100,whichisisolatedrfom thesoilin NortheasternChina,isanikkomycinproducer.Itslifecycleofmorphological differentiationisdifferentrfomthatofStreptomycescoelicolor.Theaerialhy