NY_T 915-2004 饲料用水解羽毛粉.docVIP

饲料中苯并（a）芘的测定 高效液相色谱法 Determination of benzo(a)pyrene in feeds —High performance liquid chromatography 2005-01-04 发布 2005-02-01 实施前 言 本标准在参阅了国内、外大量文献基础上，经过方法筛选，确立了用高效液相色谱法测定饲料中苯并(a)芘含量。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。 本标准主要起草单位：农业部饲料质量监督检验测试中心(沈阳)。 本标准起草人：徐国荣、田晓玲、曹东、柏云江、张建勋、田颖、徐世行。 饲料中苯并（a）芘的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了用高效液相色谱仪测定动物饲料中苯并(a)芘的方法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料中苯并(a)芘的测定，检测限为2.5μg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682分析实验室用水规则和试验方法 GB/T 14699．1饲料采样方法 3 原理 试样中的苯并(a)芘经环己烷提取，再经二甲基亚砜萃取。试样溶液过C18小柱，用环己烷洗脱。将洗脱液于旋转蒸发器上蒸干，残渣用乙腈溶解，于高效液相色谱仪测定。 4 试剂和材料 除另有规定外，仅使用分析纯试剂。水，GB/T 6682，二级用水。 4．1 色谱纯。 4．2 加活性炭重蒸馏。 4．34．4 色谱纯。 4．54．5．1 准确称取苯并(a)芘标准品(纯度≥97％、HPLC级)10mg，置于100mL量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，该贮备液浓度为100μg/mL。置4℃冰箱中保存(可保存2个月)。 4．5．2 准确吸取1 mL的标准贮备液(4．5．1)，置于100 mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度。分别准确吸取一定体积的该溶液，加乙腈制成浓度为25 ng／mL、50 ng／mL、75 ng／mL、100 ng／mL、150 ng／mL、200 ng／mL的标准工作液。 5 仪器设备 5．1 5．2 配紫外检测器。 5．3 3 000 r／min 5．45．5 65℃。 5．6 250 mg 5．7 感量0．000 1 g。 5．8 感量0．001 g。 6 试样制备 按照GB/T 14699．1饲料采样方法采样，选取具有代表性的样品，至少，500 g，用四分法缩减至200 g，经粉碎，全部过1 mm孔筛，装入磨口瓶中备用。 7 分析步骤 7．1 称取试样10 g，准确至0．002 g，置于250 mL具塞三角瓶中。加入环己烷(4．2)30 mL，超声振荡25 min，倾出上清液。残渣2次分别加人环己烷(4．2)20 mL，超声振荡20 min。合并3次提取液，离心(3 000 r／min)5 min。上清液于旋转蒸发器上(65℃)浓缩至约5 mL。用吸管将浓缩液转移至100 mL分液漏斗中，用5 mL环己烷(4．2)分数次洗涤蒸馏瓶，洗液合并于分液漏斗中。依次用10 mL、5 mL二甲基亚砜(4．3)缓慢振摇提取2次，静置10 min后，分离二甲基亚砜层(下层)于三角瓶中，加入25 mL水，摇匀。过C18净化富集柱(使用前，用20mL，甲醇(4．4)、20mL水过柱活化)，用10mL，水淋洗，抽干。用30 mL环己烷(4．2)洗脱(洗脱速度为2 mL／min)。洗脱液于旋转蒸发器上(65℃)蒸干，用2 mL。乙腈(4．1)溶解残渣，过0．45μm微孔滤膜，待测。 7．27．2．1 色谱柱：C18柱，柱长200mm，内径4 mmm，粒度5 μm,， 流动相：乙腈一水，75+25。 波长：UV296 nm。 流速：2．0 mL／min。 进样量：10μL。 7．2．2 按仪器操作规程操作。取待测液和标准工作液(4．5．2)，作单点或多点校准，以色谱峰面积积分值定量。 8 结果计算 8．1 X=………………………………………………(1) 式中： x——试样中苯并(a)芘的含量，单位为微克每千克(μg／kg)； c——试样中苯并(a)