六倍体大小麦tritordeum花药组织特异性启动子的鉴定与分离.pdfVIP

维普资讯 武汉植物学研究 2007，25(4)：321—325 Journalof WuhanBomnwalResearch 六倍体大小麦 tritordeum花药组织特异性 启动子的鉴定与分离 涂知明，陈泠，杨广笑，何光源 (华中科技大学生命科学与技术学院中英联合实验室，武汉 430074) 摘 要 ：启动子是基因表达调控的重要顺式元件，也是基因工程表达载体的一个重要元件。一个无启动子的带有 U／dA基因的质粒 pPLGUS通过基因枪转化进 tritordeum材料中，对转基因材料的多种不同组织进行了X-sluc显色 来检测不同组织中的GUS活性，有一个株系的花药组织特异性启动子已被证明成功捕获，并通过PCR方法将其分 离。提取叶片的总DNA作模板，上游使用水稻花药启动子分离的引物P1，以Ud／A基因的部分序列为下游引物P2， PCR扩增 U／dA基因的上游旁侧序列。已经获得一条长667bp的目的片断，含有部分Ud／A基因的序列和一段U／dA 基因的上游旁侧序列，该序列中具有植物启动子的一些必备元件，初步断定它是一段花药组织特异性启动子序列。 关键词：组织特异性启动子；花药； 以基因；X．she显色 中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：1000．470X(2007)04·0321·05 Taggingand Isolation oftheAnther·specificPromoterin HexaploidTritordeum TU Zhi—Ming，CHEN Lin，YANG Guang-Xiao，HE Guang—Yuan ‘ (China—UKJointLab，College ScienceTechnology，HuazhongUniversityofScienceTechnoolgy，Wuhan 430074，China) Abstract：Thepromoterisanimportantelementofgeneexpression，andtissuespecificpromotersarevery usefulin gene engineering、A promoterlessU／dA containingplasmid derived from pPLGUSwasrtans— formedintotritordeum．Histochemical analysisofvarioustissuesin transgenictritordeum wascarriedto examinetissuespecificexpressionofGUSactivity．A transfomr antlinewithanhter-specificGUS expres— sionwassuccessfullylabeledandisolated．PCR mehtodwasusedtoisolatehtisanhter—specificpromoter withDNA extractedrfom leaveastemplate，usingprimerpairofriceanhterspecificpromoter，primerP1 asforwardprimer，U／dA genespecificsequenceasreverseprimer．Bysequencingandanalyzinghteampli— fledDNA fragmentrfom PCR reaction．apartof geneandaflankingsequencewereobtained．Some essentialpromoterelementswereofundinhtissequence．Thereforehteframg entobtainedwasbelievedto beapart ofantherspecif